6：微生物遗传新解决方案.pptVIP

PCR技术 1. 直接从基因组中扩增 （1）提取基因组DNA作模板 （2）根据目的基因序列设计引物 （3）PCR扩增 PCR反应体系 50ul： 　　10×buffer 5ul　　4种dNTP混合物 各200umol/L　　引物 各10～100pmol　　模板DNA 0.1～2ug　　Taq DNA聚合酶 1U 双链DNA在受热后，配对碱基的氢键断裂，DNA两条链分开成为单链。 TGCATGCAT ATCTTGAAC TAGAACTTG ACGTACGTA TGCATGCAT ATCTTGAAC 3’ 5’ 5’ 3’ 3’ 5’ 5’ 3’ TAGAACTTG ACGTACGTA 95oC （1）DNA模板变性 模板 模板（template） 95oC TGCATGCAT ATCTTGAAC 3’ 5’ 5’ TAGAACTTG ACGTACGTA 3’ 人工合成的单链DNA小片断，碱基顺序分别与所要扩增的模板DNA双链的5‘端相同。 （2）DNA模板与引物复性(退火） 模板 模板 ATCTTGAAC 5’ 3’ ACGTACGTA 5’ 3’ 引物 引物 引物（primer）: 40-65oC DNA聚合酶按碱基配对原则在模板上延伸DNA链。 （3）DNA链的延伸 TGCATGCAT ATCTTGAAC 3’ 5’ 5’ TA