修改AC-ZL-204初始污染菌检测方法.docVIP

编AC-ZL-204 初始污染菌检测作业指导书版本： 起草/修订人 审核 批准 日期 日期 日期 颁发日期： 年 月 日 生效日期： 年 月 日 发部门：质量部 变更：新文件。 5.1 原理 目的 建立产品初始污染菌数检验及分析标准操作规程。 适用范围 本公司所有包装后灭菌前的每批产品。 参考文献 中国药典20版部 工作程序 4.1 设备： 恒温培养箱、试管、吸管、培养皿、、筒、烧杯、镊子、 剪子、橡皮塞、纱布、、 4.2 稀释液及培养基 PH 7.0氯化钠—蛋白胨缓冲液9%无菌氯化钠溶液 胰酪大豆胨琼脂培养基、酪大豆胨液体培养基、沙式葡萄糖琼脂培养基 4.3菌种及菌液制备 4.3.1 菌种及菌液制备 4.3.2 验证试验所用的菌株传代次数不得超过5代。见菌种保存及传代方法操作，以保证试验菌株的生物特性。计数培养基适用性检查，计数方法适用性检查用菌株见表1 4.3.3 菌液的制备：按表1 规定程序培养各试验菌株。取金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、枯草芽孢杆菌、白色念珠菌的新鲜培养物，用PH7.0无菌氣化钠-蛋白胨缓冲液或0.9%无菌氣化钠溶液制成适宜浓度的菌悬液；取黑曲霉的新鲜培养物加人3?5ml含0. 05% (m l/m l)聚山梨酯8 0的pH 7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液或0.9%无菌氣化钠溶液，将孢子洗脱。然后，采用适宜的方法吸出孢子悬液至无菌试管内，用含0.05%(ml/ml)聚山梨酯80的pH7. 0 无菌氣化钠-蛋白胨缓冲液或0. 9%无菌氣化钠溶液制成适宜浓度的黑曲霉孢子悬液。 4.3.4 菌液制备后若在室温下放置，应在2 小时内使用；若保存在2?8°C，可在2 4小时内使用。黑曲霉孢子悬液可保存在2?8°C,在验证过的贮存期内使用。 表1 试验菌株 试验菌液的制备 计数培养基适用性检查 计数方法适用性试验 需氧菌总数计数 霉菌和酵母菌 总数计数 需氧菌总数计数 霉菌和酵母菌 总数计数 金黄色葡萄球菌 ( Staphylococcus a u reus) C C M C C (B )26 003〕 胰酪大豆胨琼脂培养基或胰酪大豆胨液体培养基，培养温度3 0 ?3 5°C，培养时间1 8 ?24小时 胰酪大豆胨琼脂培养基和胰酪大豆胨液体培养基，培养温度 3 0 ? 3 5 °C ，培养时间不超过3 天，接种量不大于100cfu 胰酪大豆胨琼脂培养基或胰酪大豆胨液体培养基（M P N 法）培养温度3 0 ?35°C，培养时间不超过3 天，接种量不大于lOOcfu 铜绿假单胞菌 (Pseudomonasaeruginosa) CCMCC ( B )10 104〕 胰酪大豆胨琼脂 培养基或胰酪大豆 胨液体培养基，培 养温度3 0 ?35°C，培养时间1 8?24小时 胰酪大豆胨琼脂培养基和胰酪大豆胨液体培养基， 培养温度3 0 ? 3 5 °C ，培养时间不超过 3 天，接种量不大于100cfu 胰酪大豆胨琼脂培养基或胰酪大豆胨液体培养基（M P N 法），培养温 度3 0 ? 35°C，培养时间不超过3 天，接种量不大于lOOcfu 枯草芽孢杆菌 {.Bacillus subtilis) 〔CMCC(B)63 501〕 胰酪大豆胨琼脂 培养基或胰酪大豆 胨液体培养基，培 养温度3 0 ?3 5°C，培养时间1 8 ?24小时 胰酪大豆胨琼脂培养基和胰酪大豆胨液体培养基，培养温度3 0 ?35 °C ，培养时间不超过3 天，接种量不大于100cfu 胰酪大豆胨琼脂培养基或胰酪大豆胨液体培养基（M P N 法），培养温度3 0 ?35°C，培养时间不超过3 天，接种量不大0cfu 白色念珠菌 (Candida albicans) CCMCC(F)98 001〕 沙氏葡萄糖琼脂 培养基或沙氏葡萄 糖液体培养基，培 养温度2 0 ?25°C，培养时间2 ?3 天 胰酪大豆胨琼脂培养基，培养温度3 0 ?3 5 °C，培养时间不超过5 天，接种量不大于OOcfu 沙氏葡萄糖琼脂培养基，培养温度2 0 ?25°C,培养时间不超过5 天，接种量不100cfu 胰酪大豆胨琼脂培养基（M P N 法不适用），培 养温度3 0 ?3 5 °C，培养时间不超过5 天，接种量不大lOOcfu 沙氏葡萄糖琼脂培养基，培养温度2 0 ?25°C，培养时间不超过5 天，接种量不大于lOOcfu 黑曲霉（Aspergillus niger) C C M C C (F ) 98 003〕 沙氏葡萄糖琼脂 培养基或马铃薯葡萄糖琼脂培养基，培养温度20?25 °C，培养时间5?7 天，或直到获得丰富的孢子 胰