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Western Blot 1. 收集蛋白样品(Protein sample preparation)适当的裂解液，例如细胞裂解液，裂解细胞。对于某些特定的亚细胞组份蛋白，例如细胞核蛋白、细胞浆蛋白、线粒体蛋白等，可以参考相关文献提取这些亚细胞组份蛋白，也可以使用试剂盒进行抽提。收集完蛋白样品后，为确保每个蛋白样品的上样量一致，需要测定每个蛋白样品的蛋白浓度。根据所使用的裂解液的不同，需要采用适当的蛋白浓度测定方法。20-50μ蛋白（根据自己的实验需要进行选择，没有固定的量）的溶液体积即为上样量。取出上样样品至EP管中，加入5×SDS 上样缓冲液至终浓度为1×。使用5X的SDS蛋白上样缓冲液可以减小上样体积，在相同体积的上样孔内可以上样更多的蛋白样品。5X的SDS蛋白上样缓冲液可以参考相关文献资料配制。100或沸水浴加热3-5分钟，以充分变性蛋白 2. 电泳(Electrophoresis)SDS凝胶配制 ⅱ、灌胶与上样：玻璃板对齐后放入夹中卡紧。然后垂直卡在架子上准备灌胶。 先配分离胶，加入TEMED后立即摇匀即可灌胶。灌胶时，可用10ml注射器吸取胶沿玻璃缓慢放出放出，待胶面升到绿线高度时即可。然后胶上加一层水，液封后的胶凝的更快。（灌胶时，胶完全充满玻璃槽底部之前要慢一些，然后可以加快一些，胶面快到所需高度时要放慢速度。操作时胶一定要沿玻璃板流下，这样胶中才不会有气泡。加