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一。提蛋白 配RIPA 10ml配方 RIPA 9ml PMSF（100mM） 100ul 10x cocktail 1ml 组织剪碎，组织：RIPA 1：5~1:10，或裂解液500ul。匀浆（过程中每个组织匀浆完清洗，夹出碎组织）。冰上静置40min-1h，4℃ 12000rpm离心10min-15min。取上清转移到新离心管内。 如不马上进行定量变性的话，-20℃保存，最好1周内进行变性。 BCA蛋白定量与蛋白变性 配BCA液： A液：B液 50:1。蛋白样品置于冰上。每孔加5ul蛋白样本（组织样品稀释10倍，2ul组织蛋白样品+18ul RIPA）与100ul BCA液。标准蛋白与样品蛋白全部加3个孔。先加蛋白，再加BCA液，加BCA液速度尽量快，保证每孔反应时间相近。37℃摇床30min，酶标仪读数。设置波长562nm，标准蛋白浓度 mg/ml（2，1.5,1,0.75,0.5,0.25,0.125，0.025,0）。 根据读数计算蛋白浓度，稀释。一般稀释到1ug/ul或2ug/ul。配200ul稀释蛋白+50ul 5x loading buffer（有剧毒，臭味，不要沾手上）。混匀，99℃煮10min。 -20℃保存。 电泳 胶板固定，检查胶板是否放平，加水检查是否漏水。放入电泳槽内。胶板内加新电泳液加满，胶板外可加回收电泳液，胶板外电泳液液面至少摸过胶板下缘