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叶绿体色素的提取分离和理化性质 组员：陆文文 刘亚丽 刘三许 麻桃霞 罗娟娟 班级：11生科3班 日期：2013-11-19 一 实验目的： 1 掌握叶绿体色素的提取方法； 2 掌握用纸层析法提取叶绿体色素； 3 掌握叶绿体色素的部分理化性质。 二 实验原理： 叶绿体中的叶绿素a、叶绿素b、胡萝卜素和叶黄素不溶于水，但可溶于有机溶剂，故可用乙醇等有机溶剂提取。 薄层层析色谱法是将吸附剂均匀涂在玻璃板上成一薄层。把待分离的样品溶液点在薄层板的下端并把薄层板下端浸入展开剂中后，展开剂通过毛细管作用由下而上逐渐浸润薄层板，并带动样品在板上也向上移动，样品在吸附剂和展开剂之间不断地吸附脱附。由于吸附剂对样品中不同成分的吸附能力不同，从而使各成分有不同的移动速度而彼此分离。 将提取的叶绿素溶液置于光下，在透射光呈绿色，在反射光下呈樱桃红色，这种现象称为荧光现象。在反射光下叶绿素溶液之所以呈樱桃红色，是因为叶绿色分子吸收光能后处于激发状态，激发态的叶绿素分子很不稳定，当它回到基态时，将所获得的能量以辐射能的形式发射出红光量子。叶绿素的化学性质很不稳定，容易受强光、高温等的破坏，特别是当叶绿素与蛋白质分离以后，破坏更快，而类胡萝卜素则较稳定。叶绿素中的镁可以被H＋所取代而成褐色的去镁叶绿素，后者遇铜后，其中的氢（H＋）又被铜（Cu2＋）取代，形成了铜代叶绿素，便由褐色转变成蓝绿色，铜代叶绿素很稳定，且比原来的绿色还要稳定些，在光下也不易被破坏。 三 实验材料和仪器： 1. 材 料 新鲜的菠菜或小白菜等其他绿色植物叶片。 2.设 备 电子天平、研钵、烧杯、量筒、培养皿、刻度试管、试管夹、试管架、酒精灯、剪刀、圆形滤纸、小漏斗等。 3.试 剂 丙酮、四氯化碳、无水硫酸钠、6?mol/L盐酸、醋酸铜粉末、碳酸钙等。 四 实验步骤： 1.叶绿体色素的提取 2.叶绿体色素的分离 纸层析分离法纸层析装置如图所示。 具体操作为： （1）先用滤纸条 （2cm×4cm）沿长度方向卷成一个紧实的纸芯。 （2）取一张圆形层析滤纸（直径 11cm，略大于培养皿直径），在其中心位置钻一个纸芯粗度的圆形小孔（滤纸不能折叠），将卷好的纸芯一端插入孔内少许，并剪去纸芯上端多余部分，使纸芯上端与滤纸恰好平齐，下端长约1.5cm（与培养皿盖高度同）。 （3）把这个带纸芯的圆形滤纸，平放在干净的培养皿上，用细玻璃滴管吸取少量叶绿体色素的丙酮提取液，小心地滴入纸芯上端7-10 滴。注意：一定要在色素斑点稍风干后，再滴入另一滴，而且液滴不能污染滤纸。 （4）向培养皿中倒入适量（约为培养皿高度的 1/3 左右）四氯化碳，并加入一勺（适量）的无水硫酸钠，使纸芯下端浸入其中，并立即盖上培养皿。此时，推动剂借毛细管引力顺纸芯扩散至圆形滤纸上，并把叶绿体色素向四周推动，数分钟后，就可见到滤纸上出现四或五个颜色不同的同心环，并逐渐扩大。 （5）当推动剂前沿接近滤纸边缘时（约 30min 左右），取出滤纸，即可看到分离的各种色素，用 铅笔 标出各种色素的位置和名称，并绘简图示之或拍摄图片。 3. 叶绿体色素的理化性质 （1）荧光现象 观察叶片丙酮提取液（稀释前的浓提取液）在反射光和透射光下的颜色有何不同并拍摄图片。叶绿体色素溶液在反射光下呈樱桃红色，在透射光下呈绿色，说明原因。 （2）光对叶绿素的破坏作用 取叶绿体色素提取液少许，分装2支试管中，一支放在黑暗处（或用黑纸遮光）；另一支放在强光下（阳光直射），经0.5~1h 后，观察 2 支试管中溶液颜色有何不同并拍摄图片。 （3）氢和铜对叶绿素中镁的取代作用 a、 取 2 个试管，A 管中加入稀释后的叶绿体色素提取液2mL，作为对照；在B管中加入稀释后的叶绿体色素提取液5mL并加入1~2滴浓盐酸，摇匀，溶液变为褐色，拍摄图片，此时叶绿素中的镁（Mg2＋）被氢（H＋）取代而生成了去镁叶绿素。 b、从 B 管中分出一半装人 C 管，作为对照，在 B 管余下的溶液中加入一小粒醋酸铜结晶，将B 管和 C 管都在酒精灯上慢慢加热，则B 管中的溶液又转变在蓝绿色，拍摄图片，这是因为其中的氢（H＋）又被铜（Cu2＋）取代，形成了铜代叶绿素。以叶绿素a为例，反应过程如下： 五 实验结果分析 1.叶绿体色素的分离 图1 图2 2.叶绿体色素的理化性质： （1）荧光现象 图3 透射光 图4 反射光 图5理论图像 分析：叶绿素和类胡萝卜素吸收红橙光和蓝紫光，把绿光绝大多数都反射了出去，所以我们看到的是绿色的 图6 分析：叶绿素的化学性质很不稳定，容易受强光、高温等的破坏，特别是当叶绿素与蛋白质分离以