课内生物技术制药复习提纲2010(整理版).docVIP

2010生物技术制药复习提纲 一、基本概念 1、质粒：是存在于细胞染色体之外的双链封闭环状的DNA分子。它含有有别于细胞染色体的独立复制子，能自主地复制自身的DNA。 2、生物药物：采用DNA重组技术或其他生物新技术研制的蛋白质或核酸类药物，称为生物技术药物。 3、贴壁细胞：生长必须有可以贴附的支持物表面，细胞依靠自身分泌的或培养基中提供的贴附因子才能在该表面上生长、增殖的细胞。 4、悬浮细胞：生长不依赖支持物表面，可在培养液中呈悬浮状态生长的细胞。 5、单克隆抗体：是将抗体产生细胞与具有无限增殖能力的骨髓瘤细胞相融合，通过有限稀释法及克隆化使杂交瘤细胞成为纯一的单克隆细胞系而产生的。 6、多克隆抗体：由于病原微生物是含有多种抗原决定簇的抗原物质，因此这些抗体制剂也是多种抗体的混合物，故称多克隆抗体，即针对多种抗原决定簇的抗体。 7、人-鼠嵌合抗体：在基因水平上把鼠源性单克隆抗体的重链（H）和轻链（L）可变区分离出来，分别与人Ig的重链和轻链的稳定区（C）基因连接成人-鼠嵌合体的H和L链基因，再共转染骨髓瘤细胞，就能表达出完整的人-鼠嵌合抗体。 8、改形抗体：用鼠源性单克隆抗体的CDR序列替换人Ig分子中的CDR序列，即可使人的Ig分子具有鼠源性单克隆抗体的抗原结合的特异性。可基本消除免疫原性。这种改形抗体又称CDR移植抗体。 9、Fab抗体：用胃蛋白酶可将IgG的重链在铰链区的C端处裂解，获得两个完全相同的抗原结合片段（Fab））μm 10~100 10~100 生长形式 悬浮、贴壁 悬浮 营养要求 很复杂 很复杂 倍增时间/h 15~100 20~120 细胞分化 有 有限分化 环境影响 非常敏感 敏感 细胞壁 无 有 产物存在部位 胞内或胞外 胞内或胞外 产物浓度 低 低 含水量/% — 约90 供氧需求（Kla） 1~25 20~30 产物 疫苗、单抗、酶、生长因子、激素、免疫调节等 酶、天然色素、天然有机化合物等 动物细胞的生理特点 1）细胞的分裂周期长：细胞分裂时间为12~48h 2）细胞生长需贴附于基质，并有接触抑制现象 3）正常二倍体细胞的生长寿命是有限的 4）动物细胞对周围环境十分敏感 5）动物细胞对培养基的要求高 6）动物细胞对蛋白质的合成途径和修饰功能与细菌不同 7）动物细胞生产药物的特点：分泌胞外、纯化方便、翻译后修饰糖基化，与天然产品一致。缺点是培养条件高、成本贵、产量低。 8）动物细胞的化学组成：蛋白质、核酸、脂类、糖类 植物细胞的主要生理活性物质及其他化学成分 1）生理活性物质：酶类、维生素、植物激素、抗生素和植物杀菌素 2）其他成分：生物碱、糖苷类、挥发油、有机酸 6、试比较说明动物细胞培养基与植物细胞培养基的区别 动物细胞培养基 大致分为3类：天然培养基、合成培养基和无血清培养基 1）天然培养基：血浆凝块、血清、淋巴液、胚胎浸液以及羊水、腹水等，成分复杂，不稳定 2）合成培养基：氨基酸、维生素、糖类、无机盐、其他成分、小牛血清 添加小牛血清的作用：提供生长因子和激素；提供贴附因子和伸展因子；提供结合蛋白；提供脂肪酸和微量元素 3）无血清培养基 无血清培养基加入添加剂：激素和生长因子；结合蛋白；贴附和伸展因子；有利于细胞生长的因子和元素 优点：①提高可重复性；②减少微生物污染；③供应充足稳定；④产品易于纯化；⑤避免血清因素对细胞的毒性；⑥减少血清中蛋白对生物测定的干扰。 植物细胞培养基 1）无机盐 大量元素(＞30mg/L)：N、S、P、K、Ga、Na、Mg、Cl 微量元素(＜30mg/L)：Fe、B、Mn、I、Mo、Cu、Zn 2）碳源：糖类、肌醇、甘油 3）植物生长调节剂：生长素、分裂素、赤霉素、脱落酸、乙烯 4）有机氮源：蛋白质水解产物（如谷氨酰胺）或各种氨基酸 5）维生素：常用B族维生素、生物素和肌醇 7、试比较动物细胞与植物细胞培养操作方式的异同点 动物细胞的培养操作方式 1）培养方法：①悬浮培养：让细胞自由地悬浮于培养基内生长繁殖 ②贴壁培养：让细胞贴附在某种基质上生长繁殖 ③贴壁-悬浮培养（假悬浮培养）：微载体培养、包埋和微囊培养、结团培养 2）操作方式：分批式操作、半连续式操作、灌流式操作 植物细胞的培养操作方式 ①成批培养法；②半连续培养法；③连续培养法；④固定化培养法 8、抗体的基本结构及每一区域的功能作用 9、简要说明制备的单链抗体的基本原理及该抗体的优点 单链抗体是由一段弹性连接肽把抗体可变区重链（VH）与轻链（VL）相连而成，是具有亲代抗体全部抗原结合特异性的最小功能结构单位。在scFv中，连接肽的长度一般为15个氨基酸，常选用甘氨酸（Gly）和丝氨酸（Ser）构成一段具有一定弹性及蛋白酶抗性的多肽，其序列为（Gly