课内生物技术制药复习重点MicrosoftWord文档.docVIP

第一章 生物技术：（Biotechnology）是人类对生物资源（包括微生物、植物、动物）的利用、改造并为人类服务的技术。 生物技术制药：就是利用基因工程技术、细胞工程技术、微生物工程技术、酶工程技术、蛋白质工程技术、分子生物学技术等来研究和开发药物，用来诊断、治疗和预防疾病的发生。DNA重组技术。将重组对象的目的基因插入载体，拼接后转入新的宿主细胞，构建成工程菌；实现遗传物质的重新组合，并使目的基因在工程菌内进行复制和表达的技术。 补料分批培养：补料分批培养是将种子接入发酵反应器中进行培养，经过一段时间，间歇或连续地补加新鲜培养基，使菌体进一步生长的培养方法。 连续培养：连续培养是将种子接入发酵反应器中，搅拌培养至菌体浓度达到一定程度后，开动进料和出料蠕动泵，以一定稀释率进行不间断培养。 透析培养技术：透析培养技术是利用膜的半透性原理使培养物和培养基分离，其主要目的是通过去除培养液中的代谢产物来解除其对生产菌的不利影响。 高密度发酵：是指培养液中菌体的浓度在50gDCW/L以上，目的是降低成本，提高效率。 离子交换层析：是依据流动相中的组分离子与交换剂上的平衡离子进行可逆交换时结合力大小的差别而进行分离的一种层析方法。 疏水层析：是利用蛋白质表面的疏水区域和固定相上疏水基团之间的相互作用力差异，对蛋白组分进行分离的层析方法。 亲和层析：是利用固定化配体与目的蛋白质之间非常特异的生物亲和力进行吸附，这种结合既是特异的，又是可逆的，改变条件可以使结合解除。 凝胶过滤层析：是以多孔性凝胶填料为固定相，按分子大小对溶液中各组分进行分离的液相层析方法。 利用基因工程技术生产药物的优点？ 答：1大量生产过去难以获得的生理活性蛋白和多肽，为临床使用提供有效的保障； 2、可以提供足够数量的生理活性物质，以便对其生理、生化和结构进行深入的研究，从而扩大这些物质的应用范围； 3、可以发现、挖掘更多的内源性生理活性物质； 4、内源生理活性物质在作为药物使用时存在的不足之处，可通过基因工程和蛋白质工程进行改造和去除； 5、可获得新型化合物，扩大药物筛选来源。 基因工程药物制造的主要步骤？ 答：目的基因的克隆；构建DNA重组体；将DNA重组体转移入宿主菌构建工程菌；工程菌的发酵；外源基因表达产物的分离纯化；产品的检验等。 化学合成目的基因的先决条件？ 答：较小的蛋白质或多肽的编码基因可以采用人工化学合成，其先决条件：已知目的基因的核苷酸序列或蛋白质的氨基酸序列，按相应的密码子推导出DNA的碱基序列。 人工合成基因的限制有哪些？ 答：1、不能合成太长的基因，50~60个碱基对； 2、人工合成碱基对时，遗传密码的简并会为选择密码带来很大的困难：3、费用高。 基因工程宿主菌应满足那些要求？目前应用最广泛的宿主菌有哪些？ 答：1、容易获得较高浓度的细胞；2能利用廉价易得的原料；3、不致病、不产生内毒素；4、发热量低，需氧低，适当的发酵温度和细胞形态；5、容易进行代谢调控；6、容易进行DNA重组技术操作；7、产物的产量、产率高，产物容易提取。 宿主菌可分两大类：1、原核细胞：大肠杆菌、枯草芽孢杆菌、链霉菌； 2、真核细胞：酵母菌、丝状真菌、哺乳动物细胞。 表达载体须具备哪些条件？常用载体有哪些？ 答：1、能够在宿主细胞中复制并稳定地保存。 2、具多个限制酶切点，但每种切口最好只有1个，以便与外源基因连接。 3、具有某些标记基因，便于进行筛选。 4、所产生的mRNA必须有翻译的起始信号。 5、具有很强的启动子有很强的终止子1、细菌细胞的质粒。2、λ噬菌体载体。 真核基因在大肠杆菌中的表达形式？ 答：有三种形式：(1)融合蛋白的表达形式由一段短的原核多肽和真核蛋白结合在一起的蛋白质,称为融合蛋白.(2)非融合蛋白的表达形式(3)分泌型表达形式表达用的酵母宿主菌应具备菌体生长力强.菌体内蛋白酶要较弱.菌株性能稳定. 分泌能力强 答：蛋白质表面多由亲水基团组成，也有一些疏水性较强的疏水区。 在高盐浓度时，蛋白质表面疏水部位的水化层被破坏，暴露出疏水部位，疏水作用增强，与固定相上的疏水基团产生疏水性作用而被吸附；盐浓度降低时蛋白质疏水作用减弱，目的蛋白质被逐步洗脱下来。 亲和层析的基本原理？ 答：通过将具有亲和力的两个分子中一个固定在不溶性基质（也称载体）上，利用分子间亲和力的特异性和可逆性，对另一个分子进行分离纯化。 （被固定在基质上的分子称为配体，配体与基质共价结合，构成亲和层析的固定相，称为亲和吸附剂。） 凝胶过滤层析的优缺点？ 答：优点：设备简单、操作方便、样品回收率高、实验重复性好、不改变样品生物学活性。 缺点：分辨率较低，尤其是相对分子质量相近的分子之间。 第三章 细胞工程是指以细胞为对象，应用生命科学理论，借助工程学原理与技术，有目的地利用或