实验二 鱼类肌蛋白的提取、蛋白含量测定及其SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳检测及其Western blotting鉴定.docVIP

实验二 鱼类肌肉蛋白的提取、蛋白含量测定及其SDS－聚丙烯酰胺凝胶电泳检测及其Western blotting鉴定 将以上提取的水溶性蛋白和盐溶性蛋白进行Western blotting鉴定 实验目的和要求 了解从动物组织中提取蛋白的原理和实验方法。 熟悉蛋白质含量测定的各种方法和基本原理，并根据实验结果，比较不同种类的鱼肌肉中水溶性蛋白和盐溶性蛋白含量的差异。 掌握SDS的原理和垂直板型凝胶电泳的操作方法，并根据电泳结果，比较不同种类的鱼肌肉中水溶性蛋白和盐溶性蛋白成分的差异。 掌握Western blotting操作方法。 实验仪器、材料和试剂 （一）仪器 微量移液枪及枪头、微量离心管（又称Eppendorf 管）、50ml离心管、常用玻璃器皿（见表1）、台式天平、组织捣碎机、高速冷冻离心机、紫外分光光度计、垂直式电泳槽装置、凝胶成像系统。 （二）试剂准备 1．Buffer I（2000ml）：20mM Tris-Cl, pH8.0 。 2．Buffer II（500ml）：Buffer I含有0.5M NaCl。 四、实验操作 （一）动物肌肉蛋白的提取 1．称取新鲜的淡水鱼或海水鱼剔除鱼鳞、鱼刺及脂肪取肌肉，用刀切碎，称取3g左右，加入 30 ml 左右冰冷的Bufffer I（鱼肉[g]：Bufffer I[ml]=1:10），在捣碎机中捣碎成匀浆。 2．将以