第10章.DNA的生物合成.ppt

第三篇 遗传信息的传递 生物化学与分子生物学教研室 刘先俊 P272  二、DNA复制的基本特征 （一）半保留复制 模板 原则 特点 亲代的DNA双链，每股链都可作为模板 按碱基配对原则指导新链的合成 *合成的两个子代DNA分子碱基顺序与亲代分子完全一样 *一条链来自于亲代的DNA链，另一条链是新合成的链 （二）半不连续复制  1、 体内仅存在5’ 3’的DNA聚合酶 2、 前导链与随从链（岗崎片段） 三、参与DNA复制的一些酶类和蛋白质 DNA链合成基本条件: dNTP Mg++ 3′-OH引物 DNA模板 酶和蛋白质因子 四、DNA复制过程(起始、延长、终止） 确定复制的起始点 解开双链DNA,提供单链DNA模板 形成复制叉 DNA合成的起始和延长 形成带有新合成的DNA片段的复制泡 复制的终止 DNA复制过程.ppt 爬行模型：  催化逆转录反应的酶是逆转录酶（reverse transcriptase），也称为RNA指导的DNA聚合酶（RNA–directed DNA polymerase，RDDP）,由一个α亚基和一个β亚基组成的二聚体。逆转录酶以dNTP为底物，需要一个具有3′-OH的引物，同时需要2价金属离子（细胞的酶以Zn2+为主，病毒的酶以Mg2+为主）。逆转录酶为多功能酶，至少具有以下作用： 1．RNA指导的DNA聚合酶作用：在有引物存在时，逆转录酶可以4种dNTP为底物，以RNA为模板，按5′→3′合成DNA，形成RNA-DNA杂合体 即RNA指导的DNA聚合酶作用。 2．核酸酶H的活性即有核酸外切酶的作用。能特异性地水解RNA-DNA杂合体上的RNA，按5′→3′或3′→5′的方向均可进行，产物主要是5′-末端磷酸化的含2～8个核苷酸残基的寡核苷酸。 3．DNA指导的DNA聚合酶作用： 同样在有引物存在时，逆转录酶也可以4种dNTP为底物，以DNA为模板，按5′→3′合成DNA，形成双链DNA产物即DNA指导的DNA聚合酶作用。 逆转录病毒细胞内的逆转录现象 RNA 模板 逆转录酶 DNA-RNA 杂化双链 逆转录酶 单链DNA 逆转录酶 双链DNA 逆转录研究的意义 逆转录酶和逆转录现象，是分子生物学研究中的重大发现。 逆转录现象说明：至少在某些生物，RNA同样兼有遗传信息传代与表达功能。 对逆转录病毒的研究，拓宽了20世纪初已注意到的病毒致癌理论。 六、DNA的损伤与修复 外因 物理因素 化学因素 内因 代谢过程 复制过程 损伤(突变) DNA分子的结构改变 自发突变 诱发突变(诱变) DNA修复的基础： 一条链有损伤 修复酶切除 以未损伤的链为模板 合成原来相同的序列 （一）突变的原因 能引起生物DNA突变的理化因素或物质，称为诱变剂（mutagen）。主要有： 1．物理因素：如紫外线、高能电离辐射等，紫外线可引起DNA分子内相邻的两个胸腺嘧啶碱基之间交联而形成环丁烷基的结构即胸腺嘧啶二聚体。此外，也可形成其它的相邻嘧啶碱基之间的交联如TC、CC间。 第二、3′→5′的外切作用（3′→5′exonuclease action） 大肠杆菌DNA聚合酶Ⅰ除具有5′→3′的聚合作用外，也能催化从3′-末端水解DNA链，而产生游离的单核苷酸，称为3′→5′的外切作用。其3′→5′的外切作用对DNA的聚合具有校正功能。错位接上去的碱基C会被DNA聚合酶Ⅰ的3′→5′的外切作用水解掉，而DNA聚合酶Ⅰ再催化重新聚合上正确的碱基T。 第三、5′→3′的外切作用。 大肠杆菌DNA聚合酶Ⅰ还具有5′→3′的外切作用。大肠杆菌DNA聚合酶Ⅰ的5′→3′外切作用在DNA复制过程中用于去除引物。 但这种外切作用不同于其3′→5′的外切作用： （1）首先，其裂解的键必须位于双螺旋区域。 （2）其次，产物为单核苷酸或几个碱基组成的寡聚体。 （3）5′→3′的外切作用随着DNA合成的进行而不断增强。 （4）5′→3′的外切作用的酶的活性部位可与其聚合作用和3′→5′的外切作用的活性部位分开。 大肠杆菌DNA聚合酶Ⅰ分子量为109kD，是含有928个氨基酸残基的单条肽链。若用枯草杆菌蛋白酶处理，可将大肠杆菌DNA聚合酶Ⅰ水解为大小不等的两个片断，其中，分子量较小的为小片断，其分子量为33kD，它有5′→3′的外切作用；另一个分子量较大的称为大片断，其分子量为76kD，它有5′→3′聚合作用和3′→5′的外切作用，大片断又称为Klenow片断（Klenow fragment）。 可