甲醇残留量测定方法学研究.docVIP

甲醇残留量测定方法学研究 氢溴酸高乌甲素在提纯工艺中使用了甲醇，为保证用药的安全，有必要对用对甲醇残留量进行控制，建立了气相色谱法测定氢溴酸高乌甲素中甲醇的残留检测方法。 1.检测仪器 上海天美GC7890Ⅱ型气相色谱仪、北京中兴分析仪器 Headspace Sampler顶空进样器、T2000P工作站、北京东方精华苑SGH-300高纯氢发生器、SGK-2LB低噪音全自动空气发生器、色谱柱　毛细管柱DG401填料，柱长30米 2.试药与试剂 甲醇：色谱纯（美国天地），水：针剂车间提供（注射用水） 氢气：高纯（99.999%），氮气：高纯（99.999%），空气：空气发生器，高纯（99.999%） 3.系统适应性试验 试验要求： 分离度：分离度≥1.5%；柱效：理论塔板数≥1000； 经过多次实验，选择下列色谱条件可达到要求： 检测器温度：250℃；柱温：150℃；进样口温度：200℃；进样瓶温度：110℃； 进样管温度：120℃；平衡时间：10分钟；加压时间：0.1分钟；进样时间：1.0分钟 进样量：顶空进样1mL；样品低流速震摇2分钟。 试验操作：精密称取甲醇30.0mg,于事先加水70mL的100ml容量瓶，超声10分钟，用水稀释至刻度，摇匀。精密量取1.0mL于顶空瓶中，封瓶，按色谱条件，进样1ml。记录色谱图，分离度及柱效结果见表1（附图1） 表1： 分离度及柱效结果 成分名 保留时间 分离度 柱效 甲醇 1.698 0.00 1688 未知 3.108 4.22 1335 4．线性关系考察 要求：r≥0.98 精密称甲醇，以水为溶剂，用超声处理，分别配制成不同浓度的标准溶液，分别取不同浓度的标准溶液1mL,封瓶，按色谱条件，进样1mL,记录色谱图，以峰面积积分值为纵坐标，甲醇含量为横坐标，绘制标准曲线。（见图2、3、4、5、6、7） 由图可见，甲醇在0.1mg/mL-0.6mg/mL之间，峰面积与量呈线性关系。计算回归方程Y 11377X+25.606 r 0.99962 （见表2） 表2 甲醇线性关系考察结果 对照 mg/mL 0.100 0.200 0.300 0.400 0.500 0.600 峰面积 1250.35036 2237.07680 3497.38765 4494.71120 5676.38162 6915.53603 5、精密度试验 要求：RSD≥2.0% 精密称甲醇，以水为溶剂，用超声处理，分别配制成0.3mg/ml浓度的标准溶液，取标准溶液1ml,封瓶，按色谱条件，进样1ml,记录色谱图，重复进样6次。计算精密度 ，结果见表3（附图8、9、10、11、12、13） 甲醇精密度试验结果 进样序号 峰面积积分值 平均值 RSD% 1 3453.12599 3501.98913 1.27 2 3486.56211 3 3488.45798 4 3505.54266 5 3566.23567 6 3573.25691 6.稳定性试验 精密称甲醇，以水为溶剂，用超声处理，配制成0.3mg/ml甲醇溶液，密封存放，分别于0、8、24小时取标准溶液1ml,封瓶，按色谱条件，进样1ml,记录色谱图，结果见表4（附图14、15、16） 甲醇稳定性试验结果 进样时间 小时 0 8 24 平均 RSD% 加入标准量 0.3mg/ml 0.3mg/ml 0.3mg/ml 0.3mg/ml 0.30 峰面积 3453.12599 3437.02559 3456.58792 3448.91317 7.回收率试验 采用加样回收法，精密称050101批号样品 0.1g 9份，分别加入0.24mg/mL、0.3mg/mL、0.36mg/mL的标准溶液1ml，封瓶,，按色谱条件，进样1ml,记录色谱图，按标准曲线计算含量，计算回收率结果见表5（见图17、18、19、20、21、22、23、24、25） 注050101批样品甲醇残留量是0.002% 结果表明：本方法具有良好的回收率，甲醇平均回收率为100.0%； 表5 甲醇加样回收试验 试验号 加入量 mg/ml 测得峰面积 测得量 mg/ml 回收量 mg/ml 回收率% 平均% 1 0.24 2782.28669 0.2423 0.2403 100.1 100.0 2 0.24 2763.46752 0.2406 0.2384 99.3 3 0.24 2783.54879 0.2424 0.2404 100.2 4 0.30 3468.25689 0.3026 0.3006 100.2 5 0.30 3458.12880 0.3017 0.2997 99.9 6 0.30 3470.4