校本部医学分子生物学【参考】.docVIP

第一部分 一、名词解释： 基因：携带有遗传信息的 DNA或 RNA序列，也称为遗传因子。 ORF：“开放阅读框编码蛋白质的序列,基因调控序列和其它非编码区 CDNA的总量，用以衡量基因组的大小。 C值矛盾：在真核生物DNA中有许多重复序列以及内含子等非蛋白编码序列所表现出来进化复杂性无关甚至矛盾的 重叠基因：同一段DNA片段能够参与编码两种甚至两种以上的蛋白质分子。 SNP：单核苷酸多态性，由基因组DNA上的单个碱基的变异引起的DNA序列多态性。 蛋白质组：由一个基因组(genOME)，或一个细胞、组织表达的所有蛋白质(PROTein)。 质谱技术：将样品分子汽化并电离成离子，通过测定离子的质荷比（m/z）和强度来进行定性和定量分析。 PMF:肽质量指纹图，蛋白质经过酶解成肽段后，获得所有肽段的分子质量，形成一个特异的肽质量指纹图谱，通过数据库搜索与比对，便可确定待分析蛋白质分子的性质。 基因工程：基因拼接技术和DNA重组技术，是以分子遗传学为理论基础，以分子生物学和微生物学的现代方法为手段，将不同来源的基因按预先设计的蓝图，在体外构建杂种DNA分子，然后导入活细胞，以改变生物原有的遗传特性、获得新品种、生产新产品被限制酶切开的DNA两条单链的切口，带有几个伸出的核苷酸，它们之间正好互补配对，这样的切口叫黏性末端。 多克隆位点：载体上含有的一个人工合成的DNA片段，其上含有多个单一酶切位点，是外源DNA的插入部位。 报告基因：一个表达产物非常容易被鉴别的基因，利用其表达产物来标定目的基因的表达调控，筛选得到转化体。 转化：将质粒导入大肠杆菌或其它细胞的过程。 感受态细胞：理化方法诱导细胞，使细胞膜出现一些孔洞，使其适合摄取和容纳外来DNA的生理状态。 二、问答题 1简述SNP研究的意义。（单核苷酸多态性） SNP--由基因组DNA上的单个碱基的变异引起的DNA序列多态性。 据估计，人类基因组中每1kp就存在一个SNP位点，共有约300万个之多，是人群中个体差异最具代表性的DNA多态性。 相当一部分SNP还直接或间接与个体的表型差异、对疾病的易感性或抵抗能力、对药物的反应性等相关。 大多数SNP位点十分稳定，人类85%的SNP是共有的。 2何谓蛋白质组学？请介绍目前蛋白质组学研究中最常用的基本技术流程并简述其原理。 以蛋白质组为研究对象，分析细胞内动态变化的蛋白质组成成分、表达水平与修饰状态，了解蛋白质之间的相互作用与联系，在整体水平上研究蛋白质的组成与调控的活动规律。 第一是样品的预处理； 第二是蛋白质的分离（双向凝胶电泳或液相色谱分离）； 第三是蛋白质的鉴定及其性质和功能的研究。 3简要介绍酵母双杂交技术的原理及其用途 反式转录激活因子的DNA结合功能域和转录激活结构域在空间上较为接近时，呈现完整的GAL4转录因子活性，并激活上游激活序列的下游启动子，转录启动子下游基因。 1、发现新的蛋白质和蛋白质心功能 2、在细胞内研究抗原和抗体的相互作用 3、筛选药物的作用位点以及药物对蛋白质之间的相互作用的影响 4、建立基因组蛋白连锁图 4简单介绍质粒及其在分子生物学研究中的应用 细菌染色体以外的小分子双链环状DNA，能够自我复制并表达。 1用于保存和扩增2kb的目的DNA，2构建cDNA文库；3目的DNA测序；4核酸杂交的探针。 5作为克隆载体的质粒应具备哪些特点？ ①具有松驰型复制子（如ColE1），复制子（replicon）是质粒自我增殖所必不可少的基本条件，并可协助维持使每个细胞含有一定数量的质粒拷贝。　　在复制子外存在几个单一的酶切位点（或多克隆位点），以便目的DNA片段插入。　　具有插入失活的筛选标记，理想的质粒载体应具有两种抗菌素抗性标志，如氨苄青霉素抗性基因（Ampr）和四环素抗性基因（Tetr）等，以便从平板中直接筛选阳性重组子。　　分子量相对较小和较高的拷贝数。此外，质粒的缺点是容量较小，一般只能接受小于15kb的外来DNA，插入片段过大会导致重组子扩增速度减慢，甚至使插入片段失活。主要是对目的基因克隆，建立DNA文库和cDNA文库，其上有复制子即可。 SDS裂解法：将细菌悬浮于等渗的蔗糖溶液中，用溶菌酶和EDTA处理以破坏细胞壁，去壁细菌再用SDS裂解，从而温和地释放质粒DNA到等渗液中，然后用酚/氯仿抽提，乙醇沉淀、洗涤质粒DNA 变性DNA分子由稳定的双螺旋结构松解为无规则线性结构的现象变性时维持双螺旋稳定性的氢键断裂，碱基间的堆积力遭到破坏，但不涉及到其一级结构的改变将核酸加热变性过程中，紫外光吸收值达到最大值的50%时的温度称为核酸的解链温度，称融解温度? Southern印迹 ：是将存在于凝胶中的DNA分子转移（印渍）于固定化介质上并加以检测分析的技术。DN