动物细胞融合和单克隆抗体的制备描述.ppt

(1) (1) (2) (3) (4) (5) 植物体细胞杂交过程示意图 杂种植株 融合的原生质体AB 再生出细胞壁 脱分化 愈伤组织 再分化 植物细胞的融合 植物组织培养 植物细胞A 原生质体B 原生质体A 杂种细胞AB 去 壁 去 壁 人 工 诱 导 方法？ 促进融合的方法？ 融合完成的 标志 植物细胞B 植物体细胞杂交技术过程 动物细胞与植物细胞的差别： 提示：基本结构、全能性 无细胞壁 全能性受限制，不能发育成杂种动物 动物细胞融合与植物体细胞杂交的不同： 不需去除细胞壁 不能发育成新的动物个体 一、动物细胞融合（细胞杂交） 1、概念： 指两个或多个动物细胞结合形成一个细胞的过程。 2、结果： 形成单核的杂交细胞 3、原理： 细胞膜的流动性 4、诱导方式 物理法：离心、振动、电激 化学法：聚乙二醇（PEG) 生物法：灭活？的病毒 不同DNA的两个细胞 灭活病毒诱导细胞融合 融合后的细胞进行有丝分裂 5、动物细胞融合过程 5、过程： 动物细胞A 动物细胞B 诱导，融合 2个完整的杂交细胞AB 有丝分裂 （膜融合、质融合） （核融合） 注意：动物细胞的融合也需要把多个两种细胞放在一起，让它们随机融合后，再从中筛选杂交细胞 6、意义：突破了有性杂交方法的局限，使远缘杂交（种间、属间、科间、动植物之间）成为可能。 7、应用：成为研究细胞遗传、细胞免疫、肿瘤和生物新品种培育等的重要手段 特别是利用杂交瘤技术制造单克隆抗体 主要用于制备 单克隆抗体 获得杂种植株 用途 物理、化学方法 （同左） 灭活的病毒 物理（离心、振动、电刺激） 化学（聚乙二醇） 诱导方法 使细胞分散后诱 导细胞融合 去除细胞壁后诱 导原生质体融合 细胞融合前的处理 细胞膜的流动性 细胞膜的流动性、 植物细胞全能性 原理 动物细胞融合 植物体细胞杂交 比较项目 植物、动物细胞融合的比较 二、单克隆抗体 传统的抗体生产办法及缺陷是什么？ 抗体由什么细胞产生？ 已免疫B淋巴细胞 每个效应B细胞只分泌一种化学性质单一、特异性强的抗体 要想获得大量的单一抗体，必须克隆单一的B淋巴细胞，形成细胞群 1975，米尔斯坦和柯勒 杂交瘤技术 设计方案： 一个效应B淋巴细胞－－只分泌一种特异性抗体 小鼠骨髓瘤细胞－－能无限增殖 -化学性质单一、特异性强的抗体。 杂交细胞 2.制备过程： 诱导其融合的方法有哪些？ 融合后培养液中有几种细胞 怎样筛选出杂交瘤细胞，杂交瘤细胞有何优点 注射抗原的目的是什么 为何要进行克隆化培养和专一抗体检测，多次筛选 大量增殖杂交瘤细胞获得单抗的方法 单克隆抗体的制备中，获得能产生特定抗体的杂交瘤细胞是关键。当已免疫的B淋巴细胞与骨髓瘤细胞融合的过程中，将会形成多种细胞的混合体，包括B淋巴细胞、骨髓瘤细胞、B—B融合细胞、骨髓瘤——骨髓瘤融合细胞、B——骨髓瘤融合细胞（即杂交瘤细胞）和细胞多聚体（容易死亡，无需筛选），如何从混合细胞中提取到杂交瘤细胞呢？我们通过下面的例题进行说明。 下图是制备分泌抗X抗体的过程，根据图解回答问题： 1）图中有A、B两次筛选过程，其中A过程目的是筛选出 ，B过程目的是筛选出 。 （2）请根据以下信息，设计一方法（不考虑机械方法）从培养液中筛选出杂交瘤细胞。已知细胞合成DNA有D和S两种途径，其中D途径能被氨基嘌呤阻断。人淋巴细胞有这两种DNA的合成途径，但一般不分裂增殖；鼠骨髓瘤细胞中虽然没有S途径，但能不断分裂增殖。将这两种细胞在试管中混合，加聚乙二醇促融，获得杂种细胞。 方法： 。 原理： 。 答案：（1）杂交瘤细胞 能产生特定抗体的杂交瘤细胞 （2）方法：培养液中加入氨基嘌呤，收集增殖的细胞 原理：加入氨基嘌呤后，使D合成途径阻断，仅有D合成途径的骨髓瘤细胞及其彼此融合的细胞就不能增殖，但人淋巴细胞和骨髓瘤细胞整合后的杂种细胞可以利用淋巴细胞中的S途径合成DNA而增殖。 【解析】从不同种类细胞中筛选出杂交瘤细胞一般要经过两次筛选。第一次筛选（图中A过程）：目前常采用HAT选择培养基筛选杂交瘤细胞。其原理是：DNA的合成有D和S两种途径。B淋巴细胞具有D和S两种DNA合成途径，但一般不分裂增殖；骨髓瘤细胞只有一种DNA合成途径，即D途径，可无限增殖；杂交瘤细胞具有D和S两种DNA合成途径，它利用其中任何一个途径都可无限增殖。由于HAT选择培养基是在普通培养液中加入氨基嘌呤配制而成，由于氨基喋呤可阻断D途径，仅有D合成途径的骨髓瘤细胞及其彼此融合的细胞