上海交通大学微生物实验实验七污水中噬菌体的分离与效价测定案例.pptVIP

* * * * * * 实验七 污水中噬菌体的分离与效价测定 实验目的 掌握噬菌体分离的基本原理和方法 学会观察噬菌斑 了解噬菌斑的效价测定方法 大肠菌群的鉴定（EMB培养基上的典型菌落的革兰氏染色） 噬菌体是专性寄生物，必需寄生细菌才能繁殖，伴随细菌的分布而分布，只要有细菌的地方，就有噬菌体 噬菌体颗粒可以在环境中独立存活，但不能繁殖 噬菌体对宿主的寄生通常具有特异性 温和噬菌体和烈性噬菌体 烈性噬菌体在液体中，可以使浑浊的菌液变为澄清 烈性噬菌体在固体琼脂平板，可以形成透明的噬菌斑 利用噬菌体斑的特征可以分离、纯化、效价滴定 基本原理 噬菌斑的形成 在固体琼脂培养基上，噬菌体感染细菌后，在宿主细胞内进行核酸和蛋白质的生物合成，最后装配成噬菌体完整的颗粒，通过裂解宿主细胞释放出来，使感染的细菌不能生长，从而形成肉眼可以观察到的透明或浑浊的空斑，称为噬菌斑。 如何进行噬菌体的纯化 挑取单一清晰可见的单个噬菌斑，接种液体培养基，并加入相同指示菌，铺平板,得噬菌斑 重复多次，可以得到由一个噬菌体的后代形成的噬菌斑，即获得了纯化的噬菌斑。 观测噬菌斑的特征 如何测定噬菌体的效价 效价指1ml培养液中所含有活的噬菌体的数量 采用双层琼脂平板法，进行噬菌斑的计数，计量单位为pfu，即plaque forming unit(噬菌斑形成单位）。 获得的噬菌体滤