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（2）别构酶的结构特点和性质 已知的别构酶都是寡聚酶，通过次级键结合。 具有活性中心和别构中心（调节中心），活性中心和别构中心处在不同的亚基上或同一亚基的不同部位上。 多数别构酶不止一个活性中心，活性中心间有同促效应，底物就是调节物：有的别构酶不止一个别构中心，可以接受不同的代谢物（非底物）的调节，异促效应。 不遵循米式方程，动力学曲线是S型（正协同效应）或表观双曲线（负协同效应）。 ③调节物的别构效应(异促效应） P414 图10-46 当增加正调节物浓度时，Km减小，亲和力增大，协同性减小（对底物浓度的反应灵敏度降低） 。 当增加负调节物的浓度时，Km增加，亲和力减小，协同性增大（对底物浓度的反应灵敏度增加）。 （3）别构酶的鉴定 ①双倒数作图不是直线 ②协同指数法（cooperativity index , Ci) 饱和比值（saturation ratio, Rs) ③ Hill系数法 米氏酶：n=1 正协同： n＞1 ，越大，正协同性越大 负协同： n＜1 ，越小，负协同性越大 ④ 脱敏作用 理化处理后，仍保持活性，但失去调节性质。 脱敏后的别构酶表现为米式酶的动力学曲线 （4）别构酶调节活性的机理 有些酶在细胞内合成时，或初分泌时，没有催化活性，这种无活性状态的酶的前体称为酶原。酶原向活性的酶转化的过程称为酶原的激活。酶原激活实际上是酶的活性中心形成或暴露的过程。 pH＜5时，活性中心暴露，切除N端的44个残基的碱性肽段。 同工酶(isoenzyme)是指催化的化学反应相同，酶蛋白的分子组成形式、理化性质乃至免疫学性质不同的一组酶。这类酶存在于生物的同一种属或同一个体的不同组织、甚至同一组织或细胞中。如乳酸脱氢酶（lactate dehydrogenase,LDH），具有多种分子组成形式：LDH5（M4）、LDH4（M3H）、LDH3（M2H2）、LDH2（MH3）、LDH1（H4）。 同工酶也是研究代谢调节、分子遗传、生物进化、个体发育、细胞分化和癌变的有力工具，在酶学、生物学、和医学中均占有重要地位。 同工酶 * 四、酶活性的调节控制和调节酶 1、别构效应的调控 2、酶原的激活 3、共价调节酶 （1）调节酶浓度： 酶的诱导与阻遏、 酶的选择性降解 （2）调节酶活性: 反馈抑制、抑制剂与激活剂的调节、 别构调节、可逆的共价修饰、酶原激活、 同工酶形式的调节 激素及特异调控蛋白对酶活性的调节 酶活性的调节控制 别构酶又称为变构酶，指酶分子的非催化部位（活性中心）与某些化合物可逆地非共价结合后，引起酶的构象的改变，进而改变酶的活性状态，酶的这种调节作用称为别构调节(allosteric regulation)，具有别构调节的酶称别构酶(allosteric enzyme)。凡能使酶分子发生别构作用的物质称为别构剂(effector)。 别构酶多为寡聚酶，含的亚基数一般为偶数；且分子中有催化部位（结合底物）与调节部位（结合异构剂），这两部位可以在不同的亚基上，或者在同一亚基的两个不同部位。 1、别构调控与别构酶 p413 （1）概念 1、别构调控与别构酶 1、别构调控与别构酶 别构调控与别构酶 p419 当反应速度达到最大速度一半时的底物浓度，用K0.5S表示。 ① 同促效应为正协同效应的别构酶是S型曲线 当底物浓度发生较小变化时，别构酶可以极大程度地控制反应速度。 米氏酶： [S]0.9/[S]0.1=81 别构酶（n=4）：[S]0.9/[S]0.1=3 表明表明反应速度对底物浓度的变化敏感 ，当底物浓度发生较小变化时，如上升3倍，别构酶的酶促反应速度可以从0.1Vmax升至0.9Vmax 。 ② 同促效应为负协同效应的别构酶是表观双曲线表明反应速度对底物浓度的变化不敏感 别构调控与别构酶 别构调控与别构酶 天冬氨酸转甲酰基酶（ATCase） ATP（异促） CTP（异促） N-甲酰磷酸/Asp（同促） 米氏酶：Rs=81 正协同：Rs＜81，越小，正协同性越大 负协同：Rs＞81 ，越大，负协同性越大 1、别构调控与别构酶 1、别构调控与别构酶 1、别构调控与别构酶 ① 协同模型，对称模型或齐变模型（WMC模型）： 1、别构调控与别构酶 ② 序变模型（KNF模型）： 酶分子中亚基结合底物后，构象逐个地依次变化。 应用化学修饰法对多种酶的活性中心进行研究发现，在酶的活性中心处存在频率最高的氨基酸残基是：丝氨酸、组氨酸、天冬氨酸、酪氨酸、赖氨酸和半胱氨酸。如果用同位素标记酶的活性中心后，将酶水解，分离带标记水解片段，对其进行一级结构测定，就可了解酶的活性中心的一级结构。 对各种蛋白水解酶进行类似的分析，功