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1. 什么是玻璃化现象？解决玻璃化现象的方法主要有哪几点？ 1）玻璃化现象是指植物组织培养过程中离体培养物的嫩茎或叶呈半透明水渍状的现象。（1分） 2）预防玻璃化现象的方法： （1）适当控制培养基中无机盐成分，适当提高蔗糖和琼脂浓度，减少含氮化合物的用量，降低培养基的水势。（1分） （2）适当降低CTK和GA的浓度。考虑加入适当的脱落酸。（1分） （3）增加自然光照，控制光照时间；增加容器通气，控制温度。（1分） （4）加入其他物质（如活性炭、多效唑、CCC）。（1分） 2. 如何对外植体进行表面消毒？ 1）将需要的材料用水洗干净。（1分） 2）表面灭菌：用70%酒精浸30-60s左右。（1分） 3）灭菌剂处理：0.1%升汞10分钟、或在10%漂白粉上清液中浸泡10-15分钟。（2分） 4）用无菌水冲洗3-5次左右。（1分） 3. 阐述外植体的成苗途径。 1) 外植体先形成愈伤组织，再形成完整植株 (1) 同时长芽和根（1分） (2) 先长芽，再长根（1分） (3) 先长根，再长芽（1分） 2) 形成胚状体，再发育成完整植株（1分） 3) 外植体直接形成芽和根。（1分） 4. 简述茎尖微繁技术的过程。 1）培养基的选择（1分） 2）无菌培养体系的建立（1分） 3）芽的增殖（1分） 4）诱导生根（1分） 5）试管苗的锻炼和移栽。（1分） 5. 组织培养一般进行哪几道工序? 1）培养器皿的清洗（1分） 2）培养基的配制、分装和高压灭菌（1分） 3）无菌操作—材料的表面灭菌和接种（1分） 4）将培养物放到培养室培养（1分） 5）试管苗的驯化、移栽和初期管理。（1分） 六、论述题（2个小题，任选1题，共10分） 1. 请你设计一个组培实验室，说明你设计组培实验室的各分室及其所需的仪器设备。 实验室组成： （1）准备室：烘箱、冰箱、天平、蒸馏水发生器、酸度计、高压灭菌锅；（2分） （2）缓冲室；（1分） （3）无菌操作室（接种室）：紫外光、超净工作台；（2分） （4）培养室：空调机、培养架、加湿器和除湿器、恒温培养箱；（2分） （5）驯化室：空调、加湿器、恒温恒湿控制仪、光照调节装置；（1分） （6）温室等： 空调、加湿器、恒温恒湿控制仪、光照调节装置。（2分） 2. 试述植物组织培养中外植体褐变的原理，以及防止褐变的措施。 1）植物组织培养中的褐变多是酶促褐变，多酚氧化酶（PPO）催化酚类化合物形成醌和水，醌再经非酶促聚合形成深色物质，对外植体材料形成毒害作用，影响其生长分化，严重导致死亡。（2分） 2）防止褐变的措施 （1）预处理母株和外植体 低温处理12－14h，消毒后接种到高渗培养基上3－7d，0.1％ 的漂白粉溶液浸泡10min，再接种到合适培养基上。（2分） （2）筛选适宜的培养基和培养条件 培养初期可在黑暗和弱光下，因为光照会提高PP0的活性，促进多酚类物质的氧化，培养温度不宜过高，一般较低的温度（15-20℃）可减轻褐变。（2分） （3）添加褐变抑制剂和吸附剂 褐变抑制剂包括抗氧化剂和PPO抑制剂，前者包括抗坏血酸、半胱氨酸、柠檬酸、聚乙烯吡咯烷酮（PVP）等，后者包括二氧化硫、亚硫酸盐、氯化钠等。在培养基中加入褐变抑制剂，可减轻酚类物质的毒害。PVP是酚类物质的专一性吸附剂，常用作酚类物质和细胞器的保护剂，用于防止褐变。（2分） （4）连续转移 在外植体接种后1-2天立即转移到新鲜培养基中，可减轻酚类物质对培养物的毒害，连续转移5-6次可基本解决外植体的褐变问题。（2分）1 、什么是细胞悬浮培养？简述成批培养和连续培养的的特点。 细胞悬浮培养是 使离体的植物细胞悬浮在液体培养基中进行的无菌培养。 1 ）成批培养的特点： (1) 细胞生长在固定体积的培养基上，直至养分耗尽 (2) 用搅拌的方法使细胞团和细胞均匀分布 (3) 细胞数目呈现慢 — 快 — 慢 — 停止生长的变化 (4) 必须更换新鲜培养基才能进行下一批培养。 2 ）连续培养的特点：（ 1 ）由于不断加入新鲜培养基，保证了养分的充分供应，不会出现悬浮培养物发生营养不足的现象（ 2 ）可在培养期间使细胞保持在对数生长期中。细胞增殖速度快（ 3 ）适于大规模工业化生产 2 、 无土栽培过程中应注意哪些问题？ （ 1 ）、配制营养液时，忌用金属容器，更不能用它来存放营养液，最好使用玻璃、搪瓷、陶瓷器皿。 ? （ 2 ）、配制营养液时如使用自来水，应加入少量的乙二胺四乙酸钠或腐殖酸盐化合物来处理水中氯化物和硫化物。 （ 3 ）基质应选用具有保水性、排水性和一定强度及稳定性，而且无害的物质。 （ 4 ）在栽培中，需经常测营养液中的 pH ，使其保持恒定。 （ 5 ）在水培中，植物需从营养液中吸氧，注意增加营养液中氧的含量。 3、 愈伤组织细胞