原核生物的基因调控课程.ppt

原核生物基因的表达及其调控 原核生物的转录和翻译 转录水平的调控是原核生物调控的主要方式 RNA聚合酶， 组成（α2ββ’σ） 全酶， 核心酶 各部分的功能 σ，P的识别，结合，转录起始物的异构化 β，参与RNA的合成，识别终止信号 β’，使聚合酶结合到DNA模板上 α2， 使全酶与P牢固结合 正调控：诱导物+蛋白------激活子复合物---启动子结合 负调控：阻遏蛋白与DNA结合 图：186 乳糖操纵元的负调控 双启动子的半乳糖操纵子 阿拉伯糖操纵子的双向调控 色氨酸操纵子的转录及衰减作用 原核生物在应答环境中变化，维持最适生长必须采取一种或多种调节机制 乳糖，半乳糖，阿拉伯糖操纵子——编码酶，分解底物，是分解代谢过程，是一类可诱导系统，它们的表达只有在被分解的底物存在时才有意义 负责合成代谢的操纵子，如色氨酸操纵子(tryptophan operon) 色氨酸操纵子(tryptophan operon) 没有外源色氨酸时，trp操纵子表达为合成色氨酸 有足够色氨酸时，色氨酸就成为阻遏物质，色氨酸的合成途径关闭。 如色氨酸操纵子这样，其转录可以被最终合成产物所阻遏的一类操纵子——可阻遏系统。 色氨酸操纵子除了阻遏机制以外，还受到衰减机制的控制。 衰减作用的调控系统 已知当trpO未结合有活性的阻遏蛋白时，RNA聚合酶就结合到trpP上，启动转录，合成多顺反子mRNA。但事实上, trp mRNA常在转录进入第一个基因trpE之前便终止，这表明trp操纵子除阻遏调控外必然还有 其他的调控系统。 在trpE基因起始密码子与trpP之间有一段462 bp长的前导序列. mRNA合成起始后，细胞没有色氨酸时，RNA聚合可以继续转录，有色氨酸时, 大多数RNA聚合酶不再前进，仅形成一个约140个核苷酸的RNA。 在前导序列中直接参与色氨酸操纵子调控的这一 区段就称为衰减子或弱化子( attenuator)。 它含有一段富含G/C的回文序列，形成发夹结构，在此处终止转录。衰减子是一个转录暂停信号，衰减作用的实质是以翻译手段控制基因的转录。 衰减子系统的调控同阻遏蛋白的控 制在方向上是相同的，都取决于细胞内色氨酸的水平，根据色氨酸的有无，衰减子实现其对转录终止与否的控制，这种调节方式便是衰减作用( attenuation) 。 衰减子序列本身并不能实施其调控，而必须借助前导序列中一个小肽编码区的翻译才能实现。 由以上可见 DNA,RNA的构象变化 mRNA衰减子的重建 核糖体上对tRNA对终止密码子的识别 衰减子——细胞中氨基酸的浓度高低 应答灵敏，调节灵活的多重调控 蛋白质合成的自身调控 ——核糖体蛋白翻译的自身调控 核糖体蛋白质与rRNA的结合部位 同编码核糖体蛋白的mRNA的结合部位有同源性 。 原理： 通过碱基配对与mRNA结合，形成二聚体，阻断mRNA的表达。 可能的途径： 1.反义RNA与mRNA的SD序列结合或编码区互补，形成RNA-RNA二聚体（在原核生物中, 核糖体中与mRNA结合位点位于16S rRNA 的3＇端,mRNA中与核糖体16S rRNA结合的序列称为SD序列(SD sequence), ） 2.反义RNA与引物RNA互不结合，抑制DNA的复制 3.反义RNA与mRNA5’末端结合，阻止mRNA的转录。 * * 操纵子模型 1961年，F. Jacob和J. Monod研究大肠杆菌乳糖代谢突变体提出操纵子学说（operon theory)——1965年诺贝尔奖 I Y L Z O P A I 乳糖——半乳糖+葡萄糖 ?- 半乳糖苷酶 I Y L Z O P A I repressor protein 阻遏蛋白的空间构型变化 2，乳糖不存在 1，乳糖存在 乳糖操纵元的正调控 I Y L Z O P A I 葡萄糖 抑制 腺苷酸环化酶（催化ATP 前体成为cAmp） cAMP + 蛋白CAP 不存在葡萄糖 不抑制 获得高效率转录 cAmp + 蛋白CAP Both: ?- 半乳糖苷酶 I 抑制基因 I Z：lac Z编码 ?-半乳糖甘酶 L前导序列 O 操纵子 （operator) P 启动子 （promoter） Y L Z O P A I Y：渗透酶 A：编码 乙酰转移酶 Lac Z: 编码?-半乳糖甘酶，乳糖 葡葡糖 + 半乳糖 Lac Y：渗透酶，增加糖的透性，使细菌从培养基中摄取乳糖 Lac A：编码乙酰转移酶，参与乳糖降解中副产物的去毒作用 半乳糖甘酶 乳糖+阻遏蛋白