第十三章：基因工程的操作过程.ppt

将目的基因导入动物细胞 通过卵细胞进行显微注射，将目的基因导入。 cDNA文库的大小 一个cDNA文库要包含99%的mRNA所需要的克隆数目。 N：克隆数目 P：文库包含了完整mRNA的概率（99%） 1/n：某一种低丰度（不足14份拷贝）mRNA占细胞 整个mRNA的比例 筛选文库中目的克隆最常用的方法是探针杂交法。 利用同源探针筛选目的克隆 第二节、基因表达载体的构建 用一定的限制性内切酶切割质粒，使其出现一个切口，露出黏性末端； 用同一种限制性内切酶切断目的基因，使其产生相同的黏性末端； 将切下的目的基因片段和质粒用DNA连接酶连接，形成一个重组DNA分子（重组质粒）。 vector 构建基因表达载体的目的是使目的基因在受体细胞中稳定存在，并且可以遗传给下一代，同时，使目的基因能够表达和发挥作用。因此，一个基因表达载体的组成，除了目的基因外，还必须有启动子、终止子和标记基因等。 第三节、将目的基因导入受体细胞 将目的基因导入植物细胞 农杆菌转化法 农杆菌是普遍存在于土壤中的一种革兰氏阴性细菌，它能在自然条件下趋化性地感染大多数双子叶植物和裸子植物的受伤部位(受伤处的细胞会分泌大量酚类化合物，从而使农杆菌移向这些细胞)，并诱导产生冠瘿瘤或发状根。 根癌农杆菌（Agrobacterium tumefaciens）是一种能诱发植物产生肿瘤的细菌，根癌农杆菌