第4章酶的分离纯化范例.ppt

第四章 酶的分离与纯化 酶的分离纯化策略 酶液的制备与初分离 酶的分离纯化方法 酶纯度的检验 酶的提取和分离纯化是指把酶从组织中、细胞内或细胞外液中提取出来并使之达到与使用目的相适应的纯度。 酶的分离提纯包括三个基本环节： 一是抽提，即把酶从材料转入溶剂中制成酶溶液； 二是纯化，即把杂质从酶溶液中除掉或从酶溶液中把酶分离出来； 三是制剂，即将酶制成各种剂型。 空间结构的稳定性 有活性的酶的空间稳定性有限，不同的酶可能有不同的稳定性 保持稳定性的环境因素 离子强度适当 最适pH 低温 加入稳定性：甘油、糖类、聚乙二醇等 第一节 酶的分离纯化策略 一、酶分离纯化基本原则 防止变性失活 低温进行 防止局部的过酸过碱 避免剧烈搅拌和泡沫形成 重金属离子能引起酶失活，有机溶剂会使酶失活，微生物污染以及蛋白酶的存在会使酶分解破坏， 其他因素：水质、辅因子等 二、酶的分离纯化策略 1、目的明确 用途： 医疗用途、活体研究等 极高纯度＞99% X射线结晶、物理化学性质研究等 高纯度95-99% N端测序、生产抗原等 一般纯度＜95% 2、建立一个可靠、快速的分析方法 目标酶蛋白，蛋白质纯度的检测，总蛋白量的检测，对必须清除的杂质的分析 纯化方法的选择--解决纯化倍数和回收率的矛盾 建立以下分析通道： 快速、可靠的分析目标酶蛋白的方法（酶活力