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谈谈固定液的使用 作者:?liza3?(站内联系TA)??? 发布: 2013-01-11 　　当前，应用于固定试剂的种类较多，它们对于固定不同的组织成分起着不同的作用，因此我们在使用时应该了解不同固定剂的效能，才能合理的固定组织。根据Bencroft的分类法，将不同的固定剂分为四种类型：　　类：醛类，甲醛，戊二醛，多聚甲醛，丙烯醛，已二醛，丙二醛等。　　类：氧化剂类，四氧化锇（奥酸），高锰酸钾，重铬酸钾等。　　类：蛋白变性类，甲醇，乙醇，醋酸等。　　类：其他，氯化汞，苦味酸等。　　上述四种类型的固定剂，最常使用的是甲醛，其余的也在其它病理技术方面中用到。下面根据使用的需要，将着重介绍几种常用的固定剂。　　（1）甲醛　　甲醛商品名为福尔马林，一般市售的含甲醛37—40%，由甲醛气体饱和于水而成，比重为1.12。它也可以稳定的固体形式存在，它的成分为高分子量的聚合体，称为多聚甲醛。　　甲醛溶液较难纯化，在每批市售商品中，都含有不少的杂质如甲醇，这种在组织化学方法当中，能使酶钝化，影响其反应。甲酸，它可使固定液变酸，在陈列标本或长时间固定的组织，由于酸的作用，往往细胞核染色欠佳。　　甲醛有效固定作用的要点是，在蛋白质末端基团之间形成交联链。参与甲醛固定蛋白质的基团，主要为氨基，亚氨基及酰氨基，肽，胍基，羟基，SH和芳香环。甲醛与组织蛋白类的反应是多样和复杂的，因为它能和多种不同的功能基团结合，在多数情况下在其间形成桥键。甲醛有这种交联的功能，也是它的缺点，在用甲醛固定过的组织中，需要做免疫组化的，往往提倡用酶消化或热抗原修复法来使蛋白与甲醛交联的醛键断裂开，以利于后来的染色。　　甲醛可配成简单的或混合的固定液，最简单和最容易掌握的方法，就是取10ml甲醛液，加水90ml，这就是10%的福尔马林.当然,现在使用的固定液要求较为严格些,最好是使用缓冲福尔马林固定液,这将有利于后来的免疫组化染色的需要.　　从组织学的观点来说,甲醛是一种良好的固定剂,它有很多的优点:　　1. 组织收缩较少,损伤少,保存固有物质好.　　2. 固定均匀,穿透力强.　　3. 能使组织硬化,增进组织弹性,有利于切片.　　4. 能保存脂肪及脂类物质.　　5. 成本较低.　　虽然甲醛有上述的优点,但这都是相对而言,任何物质都不可能十全十美的,它也有许多缺点:　　1. 杂质含量较多,如甲醇,可钝化酶类,影响反应.　　2. 含有微量甲酸,导致固定液酸变,影响染色.　　3. 可产生福尔马林色素,影响观察.　　4. 不能固定尿酸和糖类物质.　　5. 容易挥发,污染环境,可导致标本干涸.　　6. 可长期存在于固定过的组织上.有人做过实验,组织用甲醛固定后在流水中冲洗5小时后,仍留有相当多的甲醛与蛋白质相结合,但需要经过长时间的流水冲洗(24天的冲洗)方能除去.可见存在于组织上的甲醛是不可能除去的.因为临床活检不可能有这么长的时间来冲洗组织.因此要特别指出的是,在其后的各种技术操作中,要特别注意到甲醛的存在,必须要想办法除去它,否则将会给各种染色造成影响,甚至导致失败。　　应用甲醛,可以配成许多种固定液:　　1. 10%缓冲福尔马林固定液　　甲醛 100ml　　蒸馏水 900ml　　NaH2PO4　4g　　Na2HPO4　 6.5g　　该固定液是当今流行的固定液,因它对组织固定较好,损伤较少,因对其后的各方面的研究都较好,尤其是对免疫组化的染色.　　2、10%福尔马林固定液　　甲醛100 ml　　自来水900ml　　这是一种最简单的固定液，适合于边远地区携带的固定液，但由于它的单一性，因此，只要有条件的单位都不要求使用这种固定液。　　3、10%福尔马林盐固定液　　甲醛 100ml　　自来水 900ml　　Nacl 9克　　先将Nacl溶于水，再加入甲醛。这也是一种较为简单的固定液，但由于加入Nacl，它是一种重金属盐物质，加入了它可促进和改善染色，增加染色的强度。　　4、Bouin氏固定液　　苦味酸饱和水溶液 75ml　　甲醛 2 ml　　冰醋酸 5 ml　　该固定液中的冰醋酸，对胶原纤维等组织有膨胀作用。而甲醛对组织有收缩作用。两种试剂的混合使用，用以抵消彼此间的副作用。使组织固定达到优良的固定水平。　　5．醛糖钙固定液　　甲醛100ml　　蔗糖300ml　　乙酸钙20g　　蒸镏水90ml　　先将蔗糖和乙酸钙溶于蒸镏水，后加入甲醛。该固定液对于做酶的组织化学的研究效果较好，组织固定后，做冰冻切片，再给予显示。　　当前国内外基本上都还是要用甲醛来固定组织。从免疫组织化学的角度来说，甲醛固定的组织大部分都可以用免疫组化的手段来检测，据多人认为，它对IgA ，IgM，J链，K链和λ