第6章植物原生质体培养与体细胞杂交范例.ppt

第六章 植物原生质体培养与体细胞杂交 第一节 原生质体的分离和纯化 第二节 原生质体培养 第二节 植物体细胞杂交 第一节 原生质体的分离和纯化 一、植物原生质体的概念 二、原生质体的分离 三、原生质体的纯化 四、原生质体的活力测定 五、影响原生质体数量和活力的因素 一、植物原生质体的概念 1880年，Hanstein：质壁分离时，能够与细胞壁分开的那部分细胞物质。 原生质体(protoplast) ：去掉细胞壁的细胞或是由质膜包裹的具有生活力的裸露细胞。 亚原生质体(subprotoplast)：在原生质体分离过程中，有时会引起细胞内含物的断裂而形成一些较小的原生质体，它可以具有细胞核或没有细胞核。 核质体(nuclearplast)：由原生质膜和薄层细胞质包围细胞核形成的小原生质体。 二、原生质体的分离 1.机械法分离原生质体 借助利器（如刀等）或机械磨损等措施使细胞壁破损，促使原生质体释放的方法。 2. 酶解法分离原生质体 借助酶解液的作用降解细胞壁，获得大量有活力的原生质体的方法。 （1）材料选择 （2）材料预处理 目的：改变细胞和细胞壁的生理状态，提高酶解效率，提高原生质体的活力和分裂频率。 方法： 低温处理、 暗处理、 预培养等。 纤维素酶： 从绿色木霉中提取的一种复合酶制剂。作用是降解纤维素，得到裸露的原生质体 。 如