培训课件--抗体.pptVIP

* 能释放某些生长因子促进杂交瘤生长 ③饲养细胞 单个或少数杂交瘤细胞在体外培养很难成活，必需加入其它细胞以维持 其代谢，才能使之成活繁殖，被加入的这种细胞称为饲养细胞。 常用小鼠腹腔巨噬细胞 * ④培养基 * ⑤杂交瘤细胞的筛选 * 阳性孔的检测 * ⑥杂交瘤细胞的克隆化 * 有限稀释法： 将需要再克隆的细胞株自培养孔内吸出并作细胞计数，计出1mL的细胞数。 用培养液稀释，使细胞浓度为50～60个/mL，于96孔培养板中每孔加0.1mL(五六个细胞/孔)，接种2排； 剩余细胞悬液用HT培养液作倍比稀释，再接种2排，如此类推，直至使每孔含0.5～1个细胞。 培养7～10d后，选择单个克隆生长的阳性孔再一次进行克隆。 一般需要如此重复3～5次，直至达100％阳性孔率时即可，以确保抗体由单个克隆所产生。 * 在加入饲养细胞的无菌平皿内铺上一层0.5％的琼脂，待凝固后再铺上一层混有杂交瘤细胞的0.25％的软琼脂。待细胞长成集落后，用毛细管吸出移种于含饲养细胞的96孔板内。 软琼脂培养法 * b 、腹水的制备：常规是先腹腔注射0.5ml Pristane (降植烷)或液体石蜡于BALB/C鼠，1～2周后腹腔注射1×106个杂交瘤细胞，接种细胞7～10天后可产生腹水。 ⑦单克隆抗体的大量生产 （1）体内诱生法 即体内接种杂交瘤细胞，制备腹水或血清。 a、 实体瘤法：对数生长