质粒构建技术.pptVIP

◆说明书的问题----Q我 ◆价格问题----购买or交换 ◆质粒名称的问题----认清标签、基因名等 ◆库中没有的质粒----Q我或建议客户构建 ◆信息不全的质粒----建议客户先试用后付款 ◆提供量及形式----2微克，液体，要菌液的客户可以答应 ◆客户验证不出或不对----答应换正确的或退钱 亚 源 制 帽 网 站 建 设 巴傲得生物——专业抗体解决方案 重组质粒 报告人：王 期 基因克隆 gene cloning 基因克隆的基本程序： 分— 切— 接— 转— 筛 PCR 酶切 连接 转化、转染 抗性或标记筛选 目的基因DNA片段的获得 外源DNA分子与载体DNA分子的体外重组 重组DNA分子转移到适当的受体菌或细胞 重组DNA分子克隆的筛选和鉴定 目的基因或其表达产物的纯化和鉴定 基因克隆技术的特点： 1、可在体外人工的，有目的的，根据需要进行基因的重组、表达、测序、诱变、修复； 2、方法简便、快速、准确、特异，能保证研究与开发的需要。 重组质粒（过表达、干扰、荧光报告质粒等） 用于细胞信号通路变化、蛋白功能、原核真核蛋白表达等研究 质粒(Plasmid) 质粒是独立于宿主细胞（如细菌）染色体之外的可进行复制和遗传的单位--双链闭合环状超螺旋DNA分子，大小从1K-200Kb。 重组质粒的构建：目的DNA的PCR扩增 DNA片段和载体的酶切 片段DNA与载体的连接 载体：Plasimd (primary) 工具酶：聚合酶 限制性内切酶 连接酶 常见的基因工程载体 载体：用于携带重组DNA，并能够使外源DNA一起复制与表达的运载工具。 根据来源:plasmid;phage;viral;BAC;YAC 根据用途分:克隆载体;原核表达载体;真核表达载体 根据与宿主的关系分:整合型载体;非整合型载体 质粒构建的外包 ▲TA克隆 ▲亚克隆 ▲定点突变 ▲质粒DNA制备 服务优势 几十种人源和小鼠的总cDNA 相对齐全的载体库存系统 时间 新客户可以免费赠送空载质粒 超人性化的售前和售后技术服务 质粒共享库PPL ▲资源共享、整合、公益的平台 ▲为科研工作者节省实验经费 ▲体现科研工作者对科研事业，生物医药领域的贡献 ☆细胞信号通路过表达质粒(野生型与突变型） 如：pcDNA3.1-flag-P53(WT)； pCMV-HA-hsp70 ； pCMV- flag-Hsp27 S78/82A； pcDNA3.1-Flag-TRAF6 ΔN ☆信号通路RNAi质粒（shRNA) 如：pRNA-U6-hsp70； Psuper-GSTPi 质粒资源分类 ☆信号通路相关报告基因质粒 如：pSTAT3-luc；pNF-κB-luc； pcDNA3-flag-JNK2-GFP； ☆原核真核相关表达载体、表达菌及重组质粒 如：pET15b, BL21(DE3)-codonplus-RIPL pFastBac?1-hEGFR（1-621aa） 质粒图谱解读 Vector backbone（空载） Recombinant plasmid (重组质粒) 质粒库质量控制 1. 一质粒一说明书(重在测序报告） 2. 不同类型质粒分类 3. 定期进行活化与冻存 4. 绩效 销售过程的问题 Case Study 案例欣赏 更 多 内 容 请 访 问