4_人源性生物制品概要.pptVIP

* * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * 6、荧光法 补骨脂S-59(150μM)结合UVA(3J/cm2) 7、纳米膜过滤法 使用20nm或50nm的膜过滤。 8、γ射线法 病毒去除方法 沉淀 层析（离子交换或亲和层析） 纳米膜过滤 人体来源生物制品制备实例 （Example of bio-preparation application to human） 一、人血浆白蛋白制剂的制备（preparation of human blood plasma albumin） （1）结构和性质 （structure and character） 人血是一种红色混浊的、具有一定腥味与粘滞性的液体。用适当的抗凝剂除去其中的有形成分（如红血球）而得到淡黄色、半透明的液体叫血浆。 血浆中除含有大量的水分以外，还含有血浆蛋白等溶质。 白蛋白（albumin）又称清蛋白，白蛋白是血浆蛋白中含量最高（3.8～4.8%）、分子量最小、分子数最多的一类蛋白质。 白蛋白对治疗因失血、创伤、烧伤等引起的休克，脑水肿和大脑损伤性所致的脑压增高，防止低蛋白血症，肝硬化或者由肾病引起的水肿与腹水等严重疾病具有良好疗效。 白蛋白为单链分子，由584个氨基酸残基组成，N端为天门冬氨酸，C端为亮氨酸，分子量为6.6×104，在离子强度为0.15时，pI为4.7，易溶于水，在60%硫酸铵饱和度以上沉淀。对酸较稳定，受热变性。 从人体中分离的白蛋白有两种：一种是从健康人血浆中分离制得的人血清白蛋白，另一种是从健康产妇胎盘中分离制得的胎盘白蛋白。 血（无抗凝剂）→自然凝固→分离出血清（无纤维蛋白酶原、凝血因子等） 血+混合抗凝剂 草酸铵 草酸钾 离 心 上清血浆 总蛋白：6.2-7.9% 白蛋白：3.8-4.8% 水：90-92% （现常用肝素、柠檬酸钠） （2）工艺路线（图3-1） 图3-1 白蛋白生产工艺路线 利凡诺,NaHCO3 pH8.6,离心分离 络合物 蒸馏水，NaCl，HCl 弱酸性，40℃，离心 离心液 浓 缩 超 滤 浓缩液 灭活病毒 65℃，1h；60℃，10h 热处理液 除菌 除菌过滤 白蛋白液 干燥 冷冻干燥 白蛋白 去杂蛋白 人血浆（%） 血浆蛋白分离纯化的工业化生产技术 血浆蛋白分离纯化的工业化生产技术 血浆蛋白分离纯化的工业化生产技术 无菌灌装技术 巴氏病毒灭活和低pH孵放病毒灭活技术 二、尿激酶（urokinase）的制备 （1）天然尿激酶是由两条肽链通过二硫键连接而成。是丝氨酸蛋白酶，丝氨酸、组氨酸是活性中心必需的氨基酸。该酶底物专一性很强，血纤维蛋白溶酶原是唯一的天然蛋白质底物，作用于Arg-Val键上，使纤溶酶原转为纤溶酶。 （2）尿激酶的pI为8-9。溶液状态不稳定。用于治疗各种新血栓形成或血栓梗塞疾病。 （3）工艺流程（图3-2） 男性尿 沉淀 10℃下，pH8.5 上清尿液 酸 化 pH5.0-5.5 酸化尿 吸 附 硅藻土，5℃ 硅藻土吸附物 洗涤 5℃，水 硅藻土柱 洗脱 0.02%氨水，0.1mol/L NaCl 洗脱液 去热源、色素 DEAE-SephadexA50柱，pH8.0, （二乙氨乙基葡聚糖） 流出液 （活性部分） 浓 缩 羧甲基纤维素（CMC柱，pH4.2) CMC柱 洗脱（HAC-NaAC) NH3+NaCl,pH11.5-11.8 洗脱液 透 析 H2O,4℃ 透析液 冻 干 成品 图 3-2 尿激酶生产工艺路线 （4）工艺要点 ①收尿：男性尿，8h内处理。调尿液pH6.5以下。 ②硅藻土吸附：加入1%的硅藻土，5℃下搅拌吸附1h。 ③洗脱：硅藻土吸附物用5℃冷水洗涤后装柱，当洗脱液由清变浑时开始收集。 ④除热原、色素：收集液用饱和NaH2PO4，调pH8.0，加NaCl调电导至22M/Ω，过DEAE-Sephadex A50层析柱，收集流出活性部分。 ⑤CMC浓缩：流出液用1mol/L HAc调至pH4.2，用蒸馏水调电导至16-17M/Ω，通过CM-C层析柱。用10倍体积的pH4.2的HAC-NaAc缓冲液洗涤柱床。洗后用0.1%氨水0.1mol/L NaCl溶液洗脱尿激酶。收集活性组分，杂质被吸附。 ⑥产品质量：无色澄清液或白色冻干粉末。酶活力15000 IU/mg蛋白质。 三、绒膜促性激素（HCG）的制备 （1）HCG的性质（character of HCG） HCG是一种糖蛋白，由α、β两亚基组成，易溶于水，pI为3.2-3.3。HCG由胎盘滋养层合体细胞所分泌。妇女妊娠45-70天，尿中HCG含量可