4789.4沙门菌检验概要.pptVIP

菌落为黑色有金属光泽、棕褐色或灰色, 菌落周围培养基可呈黑色或棕色；有些菌株形成灰绿色的菌落, 周围培养基不变。 穿刺TSI方法 TSI的反应 赖氨酸脱羧酶试验 分离培养中的注意要点 非典型的沙门氏菌菌落形态：不存在典型的或可疑的沙门氏菌菌落时，按如下步骤检验非典型的沙门氏菌菌落。 HE和XLD琼脂：非典型的沙门氏菌在HE和XLD琼脂上呈黄色菌落，带或不带黑色中心。HE和XLD平板经24±2小时培养后，没有典型的沙门氏菌菌落，则挑取2个或更多个非典型的沙门氏菌菌落。 BS琼脂：某些非典型菌株产生绿色菌落，其周围培养基稍微或不呈暗色。如果BS平板培养24±2小时后，没有出现典型菌落，则不挑取任何菌落，让平板继续培养24±2小时。如果经48±2小时培养后，仍没有典型或可疑的菌落出现，则挑取2个或更多个非典型的菌落。 沙门菌显色培养基 沙门菌显色培养基主要用于快速筛选、分离沙门菌。其基本原理：利用沙门菌特异性酶与显色基团的特有反应，使色原游离出来，沙门菌在培养基上呈紫色或紫红色。而大肠杆菌等其他肠道杆菌呈蓝绿色。 色原-特定结合物 色原＋特定结合物 沙门菌辛酸脂酶 无色 显色 游离 可疑菌落的生化鉴定 自选择性琼脂平板（至少2种选择性平板）上直接挑取2个以上可疑菌落，分别接种三糖铁琼脂(TSI)。 TSI的主要成分：蛋白胨、乳糖、蔗糖、葡萄糖、硫酸亚铁铵、硫代硫酸钠、酚红、琼脂。 在TSI琼脂中有2个指示剂体系： --酚红:在碱性环境中呈红色；在酸性环境中呈黄色。 --硫酸亚铁铵：是硫化氢的指示剂，可与硫化氢反应生成硫化铁呈黑色。硫代硫酸钠可防止硫化氢氧化形成S-S基而影响反应。 沙门菌在TSI琼脂上的反应 斜面 底层 产气 H2S 可能的菌属和种 – + +/– + 沙门菌属、弗劳地氏柠檬酸杆菌、变形杆菌属、缓慢爱德华氏菌 + + +/– + 沙门菌、弗劳地氏柠檬酸杆菌、普通变形杆菌 – + – – 伤寒沙门菌、鸡沙门菌、志贺菌属、大肠埃希氏菌、蜂窝哈夫尼亚菌、摩根氏菌、普罗菲登斯菌属 – + + – 沙门菌属、大肠埃希氏菌、蜂窝哈夫尼亚菌、摩根氏菌、普罗菲登斯菌属 + – + – +/– – – – 非沙门菌 赖氨酸脱羧酶试验 赖氨酸脱羧酶试验培养基：蛋白胨、酵母浸膏、葡萄糖、溴麝香草酚蓝（紫）。 原理：细菌使氨基酸脱羧，产生胺类，使培养基变碱，颜色不改变。 沙门菌的反应：阳性。 意义：柠檬酸杆菌、志贺菌 均为阴 性；埃希氏菌不定。 注：本试验的阳性反应为培养基不改变颜色,而培养基变黄色者为阴性反应。本试验一定要设空白对照。培养基需用液体石蜡封盖，阻止空气的氧化作用。 靛基质试验 靛基质试验的培养基：蛋白胨水。 原理：细菌分解蛋白胨中色氨酸，生成靛基质，与对二氨基苯甲醛作用，形成玫瑰吲哚而呈红色。 沙门菌的反应：阴性反应或阳性（靛基质阳性变种）。 尿素酶试验 尿素培养基：蛋白胨、葡萄糖、酚红、氯化钠、磷酸二氢钾、尿素，pH7.2。 原理：含尿素酶细菌能分解尿素，产生大量的氨，使培养基呈碱性，指示剂变红。 沙门菌的反应：阴性。 氰化钾试验 氰化钾试验培养基：蛋白胨、磷酸盐缓冲对、氯化钠、氰化钾。 原理：氰化钾是剧毒药物，可抑制某些细菌的呼吸酶系统，使这些酶失去活性，细菌的生长因此受到抑制。而某些细菌可对氰化钾产生抗性，能在氰化钾培养中生长。本试验常用于沙门菌与柠檬酸杆菌的鉴定。 沙门菌生长情况：阴性（不生长）。 注：本试验必需设置对照管（不加氰化钾），若对照管细菌生长良好，试验管细菌不生长，可判定为阴性。若对照管与试验管均无细菌生长，则应重复试验。试验失败的主要原因是封口不严，氰化钾逐渐分解，生成氢氰酸气体逸出，以致药物浓度降低细菌生长，呈假阳性反应。 沙门菌生化鉴定培养基- β-半乳糖苷酶(ONPG)试验 β-半乳糖苷(ONPG)培养基：蛋白胨、ONPG。 原理：大肠杆菌含有β-半乳糖苷酶，能分解ONPG，使培养基呈黄色。 沙门菌的反应：阴性。 注：本试验主要用于不产H2S的沙门菌与大肠杆菌的判定 沙门菌生化鉴定的主要试验项目 糖发酵试验：三糖铁琼脂(葡萄糖、乳糖、蔗糖)、甘露醇、山梨醇、卫茅醇、水杨苷、ONPG。 氨基酸和蛋白质代谢试验：靛基质、赖氨酸脱羧酶、尿素酶。 碳源和氮源利用试验：丙二酸盐。 其他生化试验：氰化钾。 沙门菌在API 20E的典型反应 第1位数 第2位数 第3位数 第4位数 第5位数 第6位数 第7位数 结果判定 ON P G ADH L DC ODC C I T H2S URE T D A IND VP GEL GLU MAN INO S O R RHA SAC M