用氨基酸直接分法测定色氨酸.docVIP

用氨基酸直接分析法测定色氨酸 摘要：本文建立了一种采用离子色谱法，积分脉冲安培检测器从氨基酸直接分析测定色氨酸的方法。选择的色谱条件为：AminoPac PA10分析柱，水，乙酸钠和氢氧化钠三种溶液梯度淋洗，积分脉冲安培检测。选择不同的梯度形成两种方法，他们的检测限在0.12-0.14 μM之间（10 μL进样），定量限在0.14-0.46 μM之间，1 μM –100μM成线形，RSD小于2.45％，可以用于具体定量。 关键词：离子色谱；色氨酸；AminoPac PA10 由于在蛋白质和多肽水解制样过程中色氨酸会发生化学分解，所以蛋白质和多肽中色氨酸的测定是比较困难的。因此人们发展了许多方法来单独保存和测定这种氨基酸。为了保存色氨酸，可将一些硫醇抗氧化剂如巯基乙酸、亚硫基二乙酸或十二烷基硫醇[1,2]等被加入到6 N盐酸溶液中。加入苯酚的做法也有报道[3-5]。另外采用对甲基苯磺酸[6]，含3-(2-氨基乙基)吲哚的甲基磺酸[7]和巯基甲基磺酸[8,9]取代盐酸进行样品水解可以改善色氨酸的回收率。 现在常用的测定色氨酸的方法是AOAC推荐出版的方法[10]。该方法使用氢氧化钠水解，水解后调节pH，再经过离心处理，则所得到的清液就可以用氨基酸分析仪进行测定了。阳离子交换色谱测定氨基酸常常需要1 h时间，而反相色谱则仅仅需要45 min [11]。为了得到高到中