_大肠杆菌生长曲线测定_实验方案的改进_饶可扬.docxVIP

大连教育学院学报1年第、2期大肠杆菌生长曲线测定》 实验方案的改进可 扬要 本文 通过时 大肠 样菌生 长曲 线测 定方 法 的研完, 采 用加大接种量 , 大瓶 接, 然后 分试 管培 养的方法 , 时原实验方案进 行改 进 , 减少 了操竹误 差 , 缩 短 了实验 时, `吏这 一 基础实验在微生 物 学课程 中昔遍开设 成 为可 能 。关锐饲 : 大肠 杆 菌、 生 长 曲 线肠杆菌生长, 曲线的测定是微生物学实验 中常见的墓本实验。 对于学生理 解微 生生长和繁殖的规。律 , 了解不同培养条件对微生物生长和繁殖情况的影响都是必不可少。 但是 , 常规实验方案有两个 缺点: 一是在 连续培养过 程 中, 多次从同一三 角瓶 中取, 如果取样时间过长 , 会造成培 养温度变化 , 如果取 样过快 , 振荡不 匀, 则测定结果误差大。 这些都会影响曲线的绘制。 对此复旦大学的周德庆同志设计 了一个带有侧臂试 管的三角瓶, 可使这种误差减小`· 。 但 由于这种特制的三角瓶不易买到, 而且测定所用 的分光光度计也需 要改装, 这种方法在教学中普及有一定的困难。 二是取样测定的时间 要持续02 小时 , 使开这个实验课受到很大的限制。 因此, 虽然这个 实验很重要, 但各高校的微生 物学 实验课中却很少选做这个实验。本文根据多次试验并参考其它实验方 案② , 对常规实验方法进行改进 , 不仅提高一 r实验的准确性, 缩短了测定时间 , 间时还 比常规实脸节约近一半的培养基。大肠杆菌生长曲线测定的常规实验以 范秀容、 沈萍编的《微生物学实验》 为标准 ,改进后的 实验方案如下 :1 . 将大肠杆菌菌种制成约 18 亿 /毫升的菌悬液。 一般情 况下每 1 0 毫升培养1 8 小时 的大肠杆菌培养液, 离 心 ( 30 0 O r · p · m ` 1 0) 后制成 20 毫升菌悬液即可。. 取 24 0 毫升无菌培养液一瓶 , 按 5 纬接种量, 接入上 述菌种。 充分摇匀后分装2 4 支无菌试管 中 ( 每支 10 m l) 。 分别标明 1 一 24 傲 置37 ℃ 振 荡培养 , 培养 1 . 。 小时后将 31 一61 号试管取出 , 每支各加入无菌酸溶液0 . 52 毫升 , 再继续振荡培养。 培养 1 . 5 小时后将 71 一42 号试管取出, 每支各加入无菌浓缩肉汤 蛋 自脉液0 . 25 毫升, 然 后继 续振荡培养 。一按下表将不同培养时间 , 不同 培养条 件的试管取出, 放入 4 ℃ 冰箱 中保存。 作当稀释, 使菌悬液的光密度 ( O D 值 ) 控制在。 . 0一。. 4 范围内 , 再置光电比色计 中进 行比浊测 定 (4 0 一4 0 毫微米波长) , 用未接种的肉汤蛋 白膝液为空 白对照 。 记下 光密度值。一_·1 0 9·取小样一时间。}5{.!1一.一。一一(一一)1.一兮一1421!10523n勺妇,二J734一5一7马吕一ǎ内bl,J.2.209286自1,试管编号2} 3 } 4!5!6……1n曰.,J7上1 石几l, 甘O. 按间隔时间全部测完以后 , 以 菌悬液光密度值 ( O D ) 为纵坐标, 培养时间( h r ) 为横坐标绘出大肠 杆菌在正常、 加 酸、 加 营养三 种条件下的生长 曲线 。 改进后所绘制的生长曲线图如下 :进 : 盆糊 时取 朔林 . 之知奉亡和汀讨D. j今上.护selrLf—“ 常养—舀术-刁。 ,勺— 炙4犷`夕沙终气月r J所绘 曲线可 以看出 , 改进后所绘曲线的 四 个时期区分明显 , 与常规方法所测 曲线变化规律相 一 致 。 加 酸和加 营养对大肠杆菌生 长规律的影 响也表现得很明显 , 与正 常况相符。实验方 案 中可 以 看出, 改进方案在减少 误差方面采用了大瓶接种 , 接种后充分摇匀再分装。 取样时只将所需试管取出, 不影响其它试管正常培养的方法。 这样可以 有效地避免取样不匀和影响培养温度所引起的误差。 在缩短实验时间方面采用了增加接种量的方法 , 可 以 将整个实验时间由原来的 2 0小时缩短 到 8 小时 。 使这个实验在教学中得到采用成为可能。方案不 仅在解决实验的准确性和 可行性方而都有了明显的进展 , 而且 , 由于将原来的三角瓶培养改为试管培养和培养时间的缩短 , 使培养基的用量由原来的每小组06 0 毫升减少 到每小组 2 4 。毫升。 可 以节约实验经费约 l / 2 。 在 目前各学校教学 经费短的情况下 , 对以较少的资金 , 开设较多的高质量的实验课, 确保教学质量 , 有着重要实际意义 。一—- -一( 责任校对文阶::碑注③②① 周德庆 ,《徽生物学实验手册》 , 上海科技 出版社.8 6 年