815基因打靶导论.ppt

基因打靶技术 gene targeting 用含已知序列的基因片段与受体细胞基因发生同源重组，定点改变某一特定基因的技术手段。 建立在胚胎干细胞和同源重组技术基础上，定向改变活体遗传信息，分为胚胎干细胞和体细胞打靶两类。 基因打靶技术的优点 位点精确度高：精确的定点修饰，克服了随机插入对相邻序列的不良影响。 定量精确度高；拷贝数确定，避免了缺乏量化概念的随机导入。 稳定性强：确保整合至染色体稳定遗传。 具有时空性：打靶效应具有发育特异性、组织特异性和人为操控性。 基因打靶技术 发生在DNA同源序列之间或有相同或近似碱基序列之间的遗传交换。要有重组酶等一系列酶等的参与。(RecA) DNA同源重组模型 典型的基因打靶载体构建 正选择标记Positive selection marker 正选择标记基因在细胞内整合后，抗药性基因表达，使细胞能在相应的抗性药物中存活。即细胞在标记基因转入后存活。 使有毒药物变无毒。 如neo抗性基因对G418。即整合后使细胞产生抗药性而存活。 Neo 编码的新霉素磷酸转移酶 G418 一种与新霉素结构相似的氨基糖类抗生素 正向选择法 载体上有缺失自身调控因子的正向选择基因，只能在整合后利用靶位点上相应的表达调控元件启动表达。 例如去掉启动子和起始密码子。结果： 随机整合1—选择标记基因表达受阻 随机整合2—刚好整合在其它基因调控元件