响应面分析法优化北芪多糖提取工艺研究.docVIP

本科毕业论文 题目： 响应面分析法优化北芪菇多糖 提取工艺研究 学院： 生命科学学院 班级： 2009级生物工程一班6 月 1 日 响应面分析法优化北芪菇多糖提取工艺研究 摘要: 目的：研究北芪菇多糖提取工艺和最佳提取条件为有效开发新型食用菌—北芪菇提供方法学基础。：用苯酚—硫酸法测定北芪菇的多糖含量，对温度时间液料比单因素试验，根据ox-Benhnken的中心组合试验原理，确定响应面试验方案，做出响应面试验结果，结果通过Design-Expert软件程序进行分析，从而确定最佳提取条件结：温度90.28 ℃，时间2.06 h，液料比32.19:1。6.16078%。6.71%。 1引言 1 2材料与方法 1 2.1 材料、试剂与仪器 1 2.2 实验方法 1 2.2.1 多糖的提取工艺流程 1 2.2.2 多糖含量的测定 2 2.2.3 多糖提取率的计算 2 2.2.4 多糖提取试验的设计 2 3结果与分析 3 3.1 葡萄糖标准曲线绘制 3 3.2 单因素试验结果与分析 3 3.2.1 液料比对北芪菇多糖提取率的影响 3 3.2.2 提取时间对北芪菇多糖提取率的影响 4 3.2.3 温度对北芪菇多糖提取率的影响 5 3.3 响应面设计试验结果与分析 5 3.3.1 响应面分析因素水平的选取 5 3.3.2 响应面分析试验设计方案及结果 5 3.3.3 多元二次响应面回归模型的建立与分析 6 3.3.4 最佳提取条件的确定 7 4结论与讨论 7 4.1结论 7 4.2讨论 10 参考文献 10 致 谢 13 1引言 北芪菇是根据浑源县特殊的地理气候优势，依据传统中医药“药食同源”的理论，用北岳恒山正宗黄芪和多种中草药及农作物副产品作培养料加工培育而成的一种营养价值极高的新型食用菌。北芪菇为药食同用的功能型产品，其有效成分为：氨基酸并含有多种维生素和无机盐类物质。特别是，北芪菇内含有特殊功能的高倍量硒化物多糖，是普通蘑菇所没有的。对反复发作的牛皮癣患者有特殊效果。用苯酚—硫酸法测定北芪菇的多糖含量，对温度时间液料比单因素试验，根据box-benhnken的中心组合试验原理，确定响应面试验方案，做出响应面试验结果，结果通过Design-Expert软件程序进行分析[-10]，从而确定最佳提取条件，。2材料与方法 2.1 材料北芪菇购买。 95%乙醇，无水乙醇，无水乙醚，丙酮，三氯甲烷，浓硫酸，苯酚，葡萄糖，。 数显恒温水浴锅HH—6（国华电器有限公司）食品粉碎机（福州金熊电器有限公司）ar-80台式大容量离心机（常州国华电器有限公司）070MBE电热鼓风干燥箱（上海博讯实业有限公司）E-52AA旋转蒸发器(上海亚荣生化仪器厂)HB-Ⅲ旋转水式多用真空泵（郑州长城科工贸有限公司）紫外分光光度计（上海光谱仪器有限公司）。 2.2 实验方法 2.2.1 多糖的提取北芪菇过35目筛水浴回流离心（4000 r/min15 min），合并两次上清液减压浓缩至10 mL用的Sevage试剂三氯甲烷:正丁醇体积比=4:1除蛋白糖液:Seva=5:1）→离心，取上清液加入95%的乙醇静置过夜无水乙醇，丙酮，无水乙醚洗涤60 ℃恒温干燥。 2.2.2 多糖含量的测定 多糖在浓硫酸的作用下迅速水解成单糖，然后生成糠醛衍生物，与苯酚结合生成橙黄色化合物，其呈色强度与溶液中糖的浓度成正比。由于苯酚是显色的关键，%苯酚溶液不稳定极易被氧化，需现配现用苯酚80 g，NaOH0.1 g，蒸馏收集182 ℃时的馏分，准确称取重蒸馏苯酚5 g，加适量蒸馏水溶解后，转至100 mL容量瓶用水定容，摇匀后置于棕色瓶内冷藏备用。多糖提取率（%）=CD/W×100%，式中C—样品溶液中葡萄糖的含量（μg/mL）；D—样品溶液稀释倍数（mL）；W—北芪菇样品的质量（μg）。2.2.4 多糖提取验的设计 1) 葡萄糖标准曲线的制备葡萄糖标准溶液：准确称量105 ℃干燥至恒重的葡萄糖标准品10 mg，置于100 mL的烧杯中，加入少量蒸馏水溶解，转至100 mL容量瓶中，以蒸馏水定容，即得浓度为100 μg/mL葡萄糖标准液。取7支试管，按表1数据配制一系列不同浓度的葡萄糖溶液。在每支试管中，加入5%的苯酚0.5 mL，然后加入浓硫酸5 mL，迅速置于冰水浴中冷却。各管加完后室温放置20 min，在490 nm波长下比色。表 不同浓度的葡萄糖溶液 TableDifferent concentrations of glucose solution 管号 1 2 3 4 5 6 7 葡萄糖标准液/mL 0 0.1 0.2 0.3 0.4 0.6