超声波辅助提取女贞子有效成分和其含量分析.docVIP

摘要】 ? 目的以女贞子为原料，采用乙醇作为提取溶剂，探讨超声频率、溶剂浓度、料液体积比、超声提取时间等影响因素对女贞子中的齐墩果酸含量的影响。方法超声波辅助提取女贞子中齐墩果酸并用高效液相色谱仪检测其含量。结果超声波辅助提取齐墩果酸的适宜工艺条件为：料液体积比5∶40，乙醇浓度95%，超声频率44 000 Hz，提取时间60 min。在此条件下，女贞子中齐墩果酸提取含量可达到(1.271±0.002)%。 结论超声波辅助提取女贞子有效成分是行之有效的方法。 论文百事通 【关键词】 ? 女贞子; 齐墩果酸; 超声波辅助提取 女贞子为木犀科植物女贞的干燥成熟果实，具有抗炎、抑菌、降血糖、降血脂、保肝、抑制血栓形成、抗衰老及抗疲劳作用，为临床 治疗 各种肝肾阴虚型疾病的常用中药。近年来，女贞子被作为保健性食品原料进行开发，为女贞子的应用开辟了新途径[1～3]。女贞子药源广、价格低廉。我国女贞子主要分布于浙江金华、江苏大丰等地区，其齐墩果酸含量较高，可以作为提取齐墩果酸的原材料之一。石力夫等[4]采用高效液相色谱法，对女贞子中有效成分齐墩果酸进行了含量测定，测得回收率为97.9%。曹艳丽等[5]采用薄层扫描法，将女贞子粗粉用乙醇汇流提取后，对齐墩果酸进行含量分析，结果平均回收率为98.83%，周静等[6]采用气相色谱法，将样品先酸水解，再过滤烘干后，用氯仿提取，测定女贞子中齐墩果酸含量，结果平均回收率为100.6%。 　　传统的中草药提取方法主要有煎煮法、回流法、索氏法、浸泡法、渗漉法等，但大都存在周期长、成分损失大、提取率不高等缺点。近年来，超声辅助提取中草药成分具有提取时间短、提出率高、提取成分完全、污染少、设备简单等优点，得到了广泛的研究[7～9]，而超声波辅助提取女贞子中齐墩果酸的相关报道甚少。本文采用超声波辅助提取女贞子中活性成分，然后用HPLC分析萃取产物中的有效成分的含量，以期为超声波辅助提取女贞子有效成分提供行之有效的工艺条件，为 工业 化生产奠定良好的实验基础。 　　 1 材料与仪器 　　1.1 材料女贞子(成都市医药公司，经鉴定符合《 中国 药典》的规定);95%乙醇、甲醇为分析纯试剂(成都市科龙化工试剂厂);甲醇(色谱纯，上海陆都试剂厂);齐墩果酸标准品(色谱级，中国药品生物制品鉴定所);色谱用水为Mini-Q水等。 　　1.2 仪器与设备 电子 天平(TB-214，北京赛多利斯);旋转蒸发仪(RE-52B，上海亚荣生化仪器厂);超微台式离心机(WTL，江苏金坛市金城国胜实验仪器厂);真空干燥器(DZF-6021，上海一恒 科学 仪器有限公司);高效液相色谱仪(HPLC-20A，日本岛津)、超纯水仪(Milli-Q，Millopore 公司);KQ-100DE型数控超声波清洗器(昆山市超声仪器有限公司);UV-1000紫外可见分光光度计(日本岛津)。 　　 2 方法 　　2.1 紫外波长的选择使用齐墩果酸标准品扫描起点300 nm，扫描终点200 nm，扫描间隔1 nm，选择出齐墩果酸最大吸收波长，以指导HPLC的吸收波长。 　　2.2 标准曲线的绘制方法[10]精密称取齐墩果酸对照品0.001 0 g至试管中，加1 ml甲醇溶解，摇匀，作为对照品溶液(浓度0.001 mg/ml)，即得标准品溶液。精密称取齐墩果酸对照品1 mg，加甲醇定容至1 ml试管中，摇匀，得到1 mg/ml的对照品溶液。分别取对照品溶液3.0，6.0，9.0，12.0，15.0 μl进样，记录峰面积。 　　2.3 女贞子的预处理将女贞子粉碎，过40目筛，取一定量的女贞子粉末于恒温鼓风干燥箱中105℃干燥2 h，备用。 　　2.4 超声辅助回流提取精确称取5g干燥女贞子粉末于500 ml圆底烧瓶中，按照预定条件加入一定量的乙醇，按照一定的超声辅助提取的温度、时间和频率进行超声辅助回流提取，提取完毕后，将提取液于旋转蒸发仪中回流乙醇至无醇味，转至分液漏斗中，加入一定量的正丁醇分3次萃取，合并萃取液，再于旋转蒸发仪中回收正丁醇至无醇味，最后用甲醇定容于50 ml比色管中备用。 　　2.5 游离齐墩果酸含量的测定吸取10 ml萃取液于低速离心机中，3 000 r/min离心5 min，用1 ml移液枪精密吸取1 ml上层清液于EP管中，过0.45 μm微孔滤膜滤过，进样检测。测得峰面积代入回归方程 计算 ，最终计算得出提取出来的齐墩果酸含量。 　　 3 结果 　　3.1 紫外波长选择按照“2.1”的实验方法，选择出齐墩果酸的最大吸收波长为274 nm。 　　3.2 标准曲线的绘制按照“2.2”的实验方法，在高效液相色谱条件为：在色谱柱为Nova PakC18色谱柱(3.9 mm×200 mm，5 μm，中国依利特公司)，柱温30℃ ，流动