细胞生物学作业腺病毒载体导论.ppt

* 腺病毒载体 腺病毒简介 腺病毒载体构建方法 腺病毒载体优势 腺病毒载体应用前景 腺病毒简介 腺病毒是一种没有包膜的直径为70～90 nm的颗粒，由240个六邻体和12个五邻体，其中五邻体位于顶角处，从每个顶角壳粒的基底伸出一根纤毛突起，末端有一个结节区，衣壳里是线状双链DNA分子 DNA分子特点： 早期基因 基因E1a： 基因E2： 其他 晚期基因：产生病毒的结构蛋白 其两端各有一个100一165 ntLTR序列 对其他基因的转录有阻遏作用，复制所必需的基因 晚期基因表达的反式因子和病毒复制必需的因子 腺病毒侵染人体过程 腺病毒纤毛结节区粘附到细胞表面的柯萨奇/腺病毒受体 五邻体基底部的三肽（RGD）与细胞表面整合素结合，通过内吞作用进入细胞 外包装壳蛋白解体，病毒粒子穿过细胞质靠近细胞核 病毒粒子经细胞质通过核孔将遗传物质转入细胞核， → → ↓ 腺病毒载体构建方法 体外连接法 同源重组法 ：在真核细胞中进行同源重组 在原核细胞中进行同源重组 体外连接法：将外源目的基因亚克隆到腺病毒基因组的一个片段上，在体外与腺病毒的基因组相连，重新构成一个完整的腺病毒ＤＮＡ，转染敏感细胞。 不足：腺病毒基因组上适用于克隆酶切位点有限，限制了该法的利用。 具有共同或重叠序列的两种ＤＮＡ分子，通过共转染转移到某一生物体内，在一系列与同源重组有关的酶的作用下，将