微生物学实验复习案例分析.doc

微生物学实验复习 1.细菌培养基的配制过程？ 答：配制培养液→调节PH→分装→包扎→灭菌→搁置斜面（搁置斜面的长度不超过试管总长的1/2） 空的玻璃器皿一般用 干热灭菌 ，若用湿热灭菌。则要多用几层报纸包扎，外面最好加一层牛皮纸或铝箔。 接种环在用前必须烧灼灭菌，用后也应立即烧灼。 4、培养基的种类及用途： 标准 培养基类型 配制特点 主要应用 物理性质 固体培养基 加入琼脂较多 菌种分离、鉴定、计数 半固体培养基 加入琼脂较少 菌种保存 液体培养基 不加入琼脂 工业生产、连续培养 化学合成 合成培养基 由已知成分配制而成，培养基成分明确 分类、鉴定 天然培养基 由天然成分配制而成，培养基成分不明确 工业生产 半合成培养基 部分天然物质和部分化学试剂配制而成 兼有天然培养基和合成培养基的优点 目的用途 加富培养基 营养物质仅适合一种或一类微生物 能使某种微生物的生长、繁殖比其他微生物更加迅速、逐渐淘汰其他微生物 鉴别培养基 添加某种指示剂或化学药剂 菌种的鉴别 选择培养基 添加(或缺少)某种化学成分 菌种的分离 5、培养基中的营养物质： 营养要素 含义 作用 主要来源 碳源 凡能提供所需碳元素的物质 构成生物体细胞的物质和一些代谢产物，有些是异养生物的能源物质 无机化合物：CO2、NaHCO3； 有机化合物：糖类、脂肪酸、花生饼粉、石油等 氮源 凡能提供所需氮元素的物质 合成蛋白质、核酸以及含氮的代谢产物 无机化合物：N2、NH3、铵盐、硝酸盐；有机化合物：尿素、牛肉膏、蛋白胨等 生长因子 生长必不可少的微量有机物 酶和核酸的组成成分 维生素、氨基酸、碱基等 水 在生物体内含量很高，在低等生物体内含量更高 不仅是优良的溶剂，而且可维持生物大分子结构的稳定 ? 无机盐 为微生物提供除碳、氮元素以外的各种重要元素，包括某些大量元素 细胞内的组成成分，生理调节物质，某些化能自养菌的能源，酶的激活剂 ? 6、灭菌与消毒： 项目 概念 常用方法 应用的范围 消毒 使用较为 温和的物理 或化学方法 仅杀死物体 上绝大多数 微生物(包括病原微生物和有害微生物的营养细胞) 煮沸消毒法：在100 ℃煮沸5～6 min 一般物品 巴氏消毒法：70～75 ℃煮30 min或在80 ℃煮15 min 一些不耐高温的液体，如牛奶 化学药剂消毒法 如用酒精擦拭双手、用氯气消毒水源等 紫外线消毒法：30 W紫外灯照射30 min 接种室 灭菌 使用强烈 的物理或 化学方法 使物体内 外所有的 微生物永 远丧失其 生长繁殖 能力 灼烧灭菌：酒精灯火焰 接种工具的灭菌 干热灭菌：160～170 ℃下灭菌1～2 h 玻璃器皿、金属工具的灭菌 高压蒸汽灭菌：121 ℃条件下，灭菌15～30 min 培养基及容器灭菌 7.酵母的死细胞和活细胞可通过哪些方式鉴别？ 答：(、用美蓝液对酵母菌染色后，活细胞为无色，死细胞为蓝色 (、平板菌落计数法 8、实验常用的凝固剂是哪一种？固体培养基、半固体培养基及液体培养基加凝固剂琼脂的量为多少？琼脂在什么温度下溶化？什么温度下凝固？ 答：常用凝固剂是琼脂，分别为1—2%，0.5% 96°C下融化，40°C凝固 配制培养基时应遵循哪些原则？配制培养基的一般方法和步骤是什么？配制培养基时不可用铜锅或铁锅，原因是什么？答：原则：目的明确、营养协调、理化适宜、经济节约 。 铜或铁锅成份会对培养基成份造成干扰。 10、培养基分装时，液体分装高度以试管的多少为宜，三角瓶的多少为宜？固体分装高度以试管的多少为宜，三角瓶的多少为宜？半固体分装高度以试管的多少为宜？ 答：液体：试管高度的1\4,三角瓶的试管高度的1\2,固体：试管高度的1\5，三角瓶的1\2，半固体：试管高度的1\3。高度不适宜易造成搁置斜面时污染棉塞及瓶口。 11.培养基灭菌时外用牛皮纸包扎的目的是什么？ 答：防止灭菌时冷凝水润湿棉塞 12.摆斜面的正确方法是什么？ 答：试管口搁在玻璃棒或其他合适高度的器具上，搁置的斜面长度以不超过试管总长的一半为宜。 棉塞的作用是什么？正确的棉塞要求是什么？棉塞的长度多少在管口外，多少在管内为宜？作棉塞的棉花要求是什么？能否用脱脂棉？为什么？ 答：作用：阻止外界微生物进入培养基内造成污染和能通气。 14.培养基配好后，为什么必须立即灭菌？如果来不及灭菌应如何处理？ 答：很明显，培养基里含有丰富的氮源，碳源，微量元素等等。如果不立即灭菌，那么，就会长菌。 15.采用什么方法能分离到能分解并利用苯作为碳源和能源物质的细菌纯培养？（以苯作为唯一碳源的选择培养基） 答：①从苯含量较高的环境中采集土样或水样；②配制培养