不同品种灵芝中四种核苷类成分的含量比较.docVIP

不同品种灵芝中四种核苷类成分的含量比较 　　采用Dikma C18（250 mm×4.6 mm， 5 μm），以10 mmol/mL KH2PO4水溶液（pH 4.4）-甲醇为流动相梯度洗脱（流速∶1 mL/min）在260 nm波长、柱温25 ℃条件下用HPLC考察尿嘧啶、尿苷、腺嘌呤以及鸟苷在不同品种灵芝中的含量差异。结果表明，不同品种的灵芝中四种核苷类成分的含量存在显著差异，而且这种方法简便快速，稳定性和重复性良好，适用于灵芝中尿嘧啶、尿苷、腺嘌呤以及鸟苷含量的同时测定。 　　灵芝； 尿嘧啶； 尿苷； 腺嘌呤； 鸟苷 　　灵芝（Ganoderma lucidum）作为一种药食两用菌，具有补气安神，止咳平喘的功效，可用于多种疾病的治疗和保健。灵芝化学成分主要有多糖、三萜、核苷、甾醇等。其中核苷类是具有广泛生理活性的成分，已有文献报道从灵芝中分离出多种核苷类成分[1，2]。不同品种灵芝中的核苷类成分含量是否存在差异，这些差异与灵芝的质量是否存在一定的联系，这些研究尚未见报道。本研究参考文献中的核苷类物质的分析检测方法[35]，采用HPLC法建立了同时检测灵芝中尿嘧啶、尿苷、腺嘌呤以及鸟苷四种核苷类成分的方法，并对不同品种之间的含量进行比较，为灵芝中核苷类成分与灵芝质量之间的联系建立基础。 　　1仪器与材料 　　Waters AcquityHPLCTM（Waters公司，包括：四元溶剂泵，自动进样器，柱温箱，紫外检测器，Empower化学工作站等）；KQ600B型超声清洗器（昆山市超声仪器有限公司） 　　灵芝子实体来源：收集灵芝菌种156，119，140，D6，D111，D133，D164于2003年在上海市崇明县栽培获得的子实体。样品剪碎后用万能粉碎机粉成细粉过100目用于提取。 　　尿嘧啶、尿苷、腺嘌呤及鸟苷标准品（供含量测定用）购自SIGMA公司。 　　2方法与结果 　　2.1色谱条件 　　2.2对照品溶液制备 　　精密称取尿嘧啶2.4 mg、尿苷2.2 mg、腺嘌呤2.7 mg及鸟苷2.06 mg分别置10 mL量瓶中，加水并稀释至刻度，摇匀，即得尿嘧啶、尿苷、腺嘌呤和鸟苷对照品储备液。分别精密移取等量尿嘧啶、尿苷、腺嘌呤和鸟苷对照标准品储备液，制成混合溶液。 　　2.3供试品溶液制备 　　取样品细粉约1 g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精确加入蒸馏水15 mL，超声处理（功率250 W，频率40 KHz）1 h，放冷，摇匀，滤过，滤液用0.45 μm微孔滤膜滤过，即得。 　　2.4线性关系考察 　　2.5精密度试验 　　取混合对照品，连续进样5次，计算峰面积，结果尿嘧啶、尿苷、腺嘌呤、鸟苷的RSD（n=5）分别为0.80%、 2.52%、3.37%、 1.75%。表明仪器精密度良好。 　　2.6重复性试验 　　取同一品种灵芝样品5份，按2.3中方法制备供试品溶液、进样测定；计算出含量，结果尿嘧啶、尿苷、腺嘌呤、鸟苷的含量RSD（n=5）分别为2.46%、3.52%、4.80%、3.45%。表明方法重复性良好。 　　2.7稳定性试验 　　取同一供试品溶液，分别于0，2，4，8 h进样测定，计算峰面积，结果尿嘧啶、尿苷、腺嘌呤、鸟苷的峰面积RSD分别为1.26%、2.54%、3.13%、 3.90%。表明供试品溶液在8 h内稳定性良好。 　　2.8加样回收率试验 　　取同一批已知含量的灵芝样品5份，各约0.5 g，精密称定，准确加入一定量的尿嘧啶、尿苷、腺嘌呤、鸟苷对照品溶液，按“2.3”项下制备供试品溶液并进样测定，计算加样回收率。结果尿嘧啶、尿苷、腺嘌呤和鸟苷的平均加样回收率（n=5）和RSD分别为100.8%，2.3%；100.2%，2.1%；103.8，1.1%；101.5%，1.5%。 　　张圣龙，等：不同品种灵芝中四种核苷类成分的含量比较 　　2.9样品的含量测定 　　分别精密称取样品粉末各2份，按“2.3”项下制备供试品溶液，按“2.1”项下色谱条件测定四种核苷类成分的峰面积，外标法计算含量，色谱图见图1，含量测定结果见表2和图2。 　　3讨论 　　灵芝中核苷类成分比较复杂，等度洗脱相很难将4种成分在短时间同时分开，通过对不同流动相的比较采用梯度洗脱程序使核苷类成分得到满意分离。同时对流动相pH值的影响进行比较，选择 10 mmol/L的KH2PO4水溶液pH值在4.85左右，并用磷酸单独调整到不同pH值，通过对比， pH值为4.40时，四种核苷类成分的分离效果最佳。 　　不同灵芝品种的核苷的含量差异非常大，由于这些品种的栽培条件、地点和管理方式都相同，而核苷类成分差异大的原因与品种有很大的关系。栽培条件的改变是否会改变核苷类成分的种类和含量的差异，而这些