选修3动物细胞工程(上课用)导论.pptVIP

一、动物细胞融合 有些细胞的融合是正常的生命活动。如精子与卵细胞的结合。 两个细胞正在融合 受精作用 (一)动物细胞融合的概念 动物细胞融合也称细胞杂交,是指两个或多个动物细胞结合形成一个细胞的过程。 （二）动物细胞融合的过程 与植物原生质体融合原理相同，方法类似。 杂交细胞:融合后形成的具有原来两个或多个细胞遗传信息的单核细胞。 ⑴.原理： 1、动物细胞融合的基本原理是什么？ 2、动物细胞融合的诱导方式是什么？与植物细胞融合的诱导方式有什么不同？ 与植物原生质体融合的基本原理相同，即细胞膜的流动性。 ⑵.诱导方式： 物理法： 电激、振动、离心 化学法： 聚乙二醇（PEG） 生物法： 灭活的病毒 例如：仙台病毒 利用灭活仙台病毒是动物细胞融合所特有的。 灭活的病毒失去感染活性，但仍有融合活性。用于动物细胞工程中的细胞融合的诱导剂。(原理：见52页生物技术资料卡） (三）动物细胞融合技术的应用 细胞融合技术突破了有性杂交的局限，使远缘杂交成为可能。 利用杂交瘤技术，制备单克隆抗体。 动物细胞融合完成的标志：两个细胞的细胞核融合为一个细胞核。 抗体的传统生产方法 从血清中分离抗体 该法制备抗体的特点： 产量低、纯度低，且抗体的特异性差、灵敏度低。 多种效应B细胞 动物体内 多种抗体 抗原 二：动物细胞融合的成功应用——单克隆抗体的制备 单克隆抗体的制备—极富创造性的方案 将能够产生特定抗体的B淋巴细胞和具有无限增殖能力的骨髓瘤细胞融合在一起，形成杂交瘤细胞。杂交瘤细胞既能大量增殖，又能持续分泌成分单一的特异性抗体。这种单一类型的只针对某一特定抗原决定簇的抗体分子，就是单克隆抗体。 米尔斯坦(英国)和科勒(德国)因此在1984年获诺贝尔奖。 运用已学知识，设想怎样获得单一类型的抗体？ 能否用单个B淋巴细胞通过克隆形成的细胞群来产生单一类型的抗体呢？ B淋巴细胞在体外不能无限增殖。 B淋巴细胞 注射特定抗原蛋白 骨髓瘤细胞 培养骨髓瘤细胞 融合 （只考虑两两融合）培养液中融合细胞几种类型？ 骨髓瘤细胞---骨髓瘤细胞 B淋巴细胞--- B淋巴细胞 B淋巴细胞---骨髓瘤细胞 多种杂交细胞 在具有筛选作用的培养基上培养 专一抗体检验阳性 克隆上述杂交细胞 分开不同杂交细胞，克隆专一抗体， 检验阳性细胞 单克隆抗体 注射到小鼠体内 体外培养 1、单克隆抗体的制备过程 第1次筛选目的：得到杂交瘤细胞。 第2次筛选目的：在杂交瘤细胞中筛选出能产生所需抗体的杂交瘤细胞。 该细胞继承双亲细胞的遗传特性，既能产生专一抗体又能无限增殖。 杂交瘤细胞有何特点？ 特异性强，灵敏度高 由单一杂交瘤细胞增殖产生的高度专一的抗体 目的：获得产生相应抗体的B淋巴细胞 动物特异性免疫 分离B淋巴细胞（B）；找到骨髓瘤细胞（G）。注意B淋巴细胞是一个系列。（B1,B2,B3,---Bn） 细胞融合——三种融合方式:（BB;BG;GG） 第一次筛选：在“选择培养基培养”上培养筛选杂交瘤细胞 第二次筛选：在“多孔培养板上”培养杂交瘤细胞系列 ，每孔只放一个杂交瘤细胞。“克隆化培养”每个杂交瘤细胞，并进行“单一抗体检测”，“检测阳性”的孔内即是所需要的杂交瘤细胞。 选择所需要的杂交瘤克隆细胞群，体外培养或注射到小鼠腹腔内增殖。提取单克隆抗体。 7、单克隆抗体的制备过程利用了哪些原理？ 免疫原理、细胞融合原理和动物细胞培养原理 已知细胞合成DNA有D和S两条途径，其中D途径能被氨基嘌呤阻断。人淋巴细胞中有这两种DNA的合成途径，但一般不分裂增殖。鼠骨髓瘤细胞中尽管没有S途径，但能不断分裂增殖，将这两种细胞在试管中混合，加聚乙二醇促融，获得杂种细胞。请回答： （1）试管中除融合的杂种细胞外，还有 种融合细胞。 （2）设计一方法（不考虑机械方法），从培养液中分离出 杂种细胞，并说原理。 方法： 。 原理： 培养液中加入氨基嘌呤，收集增殖的细胞 加入氨基嘌呤后,使D合成的途径阻断,所以仅D合成途径的骨髓瘤细胞或彼此融合的细胞就不能增殖,但杂种细胞则可以利用淋巴细胞中的S途径合成DNA而增殖 2 3）为何要进行两次筛选？ 4）如何进行第2次筛选？ 培养在多孔培养板上，每孔只有一个杂交瘤细胞。 第1次筛选得到杂交瘤细胞（多种）。第2次筛选得到能产生特异性抗体的杂交瘤细胞群。 问题强化： 1）本过程利用了哪些原理？ 免疫原理，细胞融合原理和动物细胞培养原理 2）为什么选用小鼠骨髓