血浆氨测定解剖.pptVIP

酶法测定血浆氨 华中科技大学附属协和医院检验科 Michaelis 和 Menten 根据 Henri 提出的酶-底物复合物学说,推导了单底物酶促反应方程 酶促反应进程曲线 　连续监测法反应曲线 A单试剂连续监测法　　　 B双试剂连续监测法 实验目的 掌握酶法测定血浆氨的原理及方法 熟悉工具酶的概念及应用 了解血浆氨测定的临床意义 实验原理 NH3+ H ++ NADH + α-酮戊二酸 GLDH L-谷氨酸 +NAD+ + H2O 氨在谷氨酸脱氢酶的作用下与α-酮戊二酸反应生成谷氨酸,并将NADH 氧化为NAD+,测定 在340nm波长处的吸光度下降值，通过与标 准品340nm处吸光度的下降值比较,计算测定样本中氨的浓度。 测定条件（基本操作参数) 测定步骤 试剂R1加5ml新鲜去离子水溶解10min混匀 结果计算 △A 标准=(A1-A2)标准-(A1-A2)空白 △A样品=(A1-A2)样品-(A1-A2)空白 氨浓度（umol/L）=△A 样品/△A 标准×标准浓度 血氨标准液=58.8 umol/L 临床意义 肝昏迷的监测 儿科Reye综合症的诊断 注意事项 准确加样 严格控制反应时间 准确读数 避免氨污染