培训课件_转基因动物制备的方法的.ppt

优点： 受精卵携带外源基因的阳性率高 外源基因多单拷贝整合 操作简单，避免注射法对卵子的损害 宿主范围广 可同时感染大量胚胎，感染率及胚胎存活率高。 缺点： 容纳大小有限； 重组逆转录病毒的长末端容易甲基化，影响 外源基因的表达。 2. 5 体细胞核移植转基因法 近年来新出现的一种转基因技术。克隆绵羊 “多莉(Dolly)” 的诞生是转基因动物史上的一个里程碑。 先把外源基因与供体细胞在培养基中培养 ,使外源基因整合到供体细胞上 ,然后将供体细胞的细胞核转移到去核的卵母细胞组成重构胚胎 ,再把其移植到假孕母体 ,待其妊娠、 分娩后便可得到转基因的克隆动物。 核移植技术 该技术源于用微细玻璃管对阿米巴原虫进行的核注射 1938年，Spemann提出了细胞核的全能性和将分化的细胞核移植到卵母细胞的设想； 1952年，Briggs和King将蛙胚胎细胞核注射导卵内，构建的重组胚胎发育成蝌蚪和蛙； 1962年，Gurdon证实已分化的细胞核可恢复其全能性； 1969年，开始哺乳动物的核移植研究； 1981年，Illmenser和Hoppe将小鼠胚胎内细胞团的细胞核植入去核的受精卵中，克隆出3只小鼠； 1986年，Willadsen等用未分化的胚胎细胞克隆出一只核移植绵羊； 1987年，Robl用胚胎细胞克隆出核移植羊； 1997年，Wilmut用成年绵羊的乳腺上皮细胞为核供体，克隆出绵羊Dolly。 优点： 对体细胞进行基因改造后，用于核移植可以提高转基因的效率，不仅具有“ES细胞途径”的全部优点，且物种适用面广，无需经过嵌合体育种就可获得纯合个体，周期短，效率高。 缺点： 技术上难度大， 成功率极低， 胚胎死亡率高， 非一般实验室可以开展。 2. 6 人工酵母染色体( YAC)法 近年来发展起来的新型载体 ,具有克隆百万碱基对的大片段外源 DNA 的能力 ,可以保证巨大基因的完整性。 主要途径有: ①胚胎干细胞转入 YAC 后体外筛选 ,阳性胚胎干细胞囊胚腔注射; ②YAC原核注射。 优点： 保证大片段ＤＮＡ的完整性 。　 保证较长外源片段在转基因动物研究中的整合率提高 。 　 保证了目的基因上下游的侧翼序列的完整性，因而可以消除或减弱基因整合后的位 置效应。 ＹＡＣ介导法制备转基因动物具有广阔的应用前景。 　 除上述几种常用的转基因方法外，人们为了适应于一些特殊需要也探索了一些其他的方法。例如诱变技术(P265)等，这些方法都不太成熟，其应用也正被人们验证。 参考文献 [1] 耿彩霞,狄冉,储明星.转基因动物的制备方法及应用评述.中国畜牧兽医,2010,37(6). [2] 韩堃,刘东军.细胞核移植技术的发展及其应用.中国生物制品学志,2007,20(6):467~470. [3] 王凌云,成功,周欢敏.动物转基因研究中的技术方法.生物技术通报 2010,12:73~77. . 参考文献 [4] 陈锡文 ,管敏强 ,吴步猛.转基因动物技术 的基本方法和应用. 2004:119~123. 转基因动物的制备方法 主讲人：李金财 小组成员：李道琪 李浩云 李会娟 李佳宁 1 转基因动物的概念 转基因动物就是指用试验的方法将人们所需要的外源基因导入到动物体内 ,使这种外源基因与动物本身的染色体整合在一起 ,这样外源基因就能随着细胞的分裂而增殖 ,在动物体内得到表达 ,并且能够稳定遗传给后代的动物。 转基因动物自产生以来 ,随着研究的不断深入 ,近些年来得到了迅速的发展。由于它打破了自然繁殖中的种间隔离 ,使基因能在种系关系很远的机体间流动 ,实现了动物种间遗传物质的交换与重组 ,这不仅为遗传物质的研究提供了新的手段 ,丰富了物种的基因库 ,而且扩大了生命科学的视野。 转基因动物是动物基因工程在医学生物学研究中的突出成果。 近十年来，为分子遗传学、发育生物学、医学遗传学、肿瘤研究及优良经济动物的开发研究等多方面做出了很大的贡献。 Gordon 等人首次成功地将含有HSV 和SV40DNA 片段的重组质粒DNA 以显微注射法导入小鼠受精卵的雄原核内