2014步步高大一輪复习讲义第十一单元第45讲生物技术在其他方面的应用.docVIP

第45讲　生物技术在其他方面的应用 [考纲要求]　.PCR技术的基本操作和应用。.蛋白质的提取和分离。.实验：DNA的粗提取与鉴定。 考点　DNA的粗提取与鉴定 1．基本原理 2．操作过程 材料的选取：选用DNA含量相对较高的生物组织 　 去除杂质：利用DNA在不同浓度的NaCl溶液中溶解度的 　　 不同，通过控制NaCl溶液的浓度去除杂质 　 DNA的鉴定：在溶有DNA的溶液中加入二苯胺试剂，沸水 　　　　中加热5 min，溶液变成蓝色 易错警示　(1)本实验不能用哺乳动物成熟红细胞作实验材料，原因是哺乳动物成熟红细胞无细胞核。可选用鸡血细胞作材料。(2)实验中两次使用蒸馏水，第一次的目的是使成熟的鸡血细胞涨破释放出DNA，第二次的目的是稀释NaCl溶液，使DNA从溶液中析出。 1．下图表示以鸡血为实验材料进行DNA的粗提取与鉴定的操作程序，请分析回答下列问题： (1)步骤一中，向鸡血细胞液中加入____________并搅拌，可使鸡血细胞破裂。 (2)步骤二中，过滤后收集含有DNA的____________。 (3)步骤三、四的操作原理是________________________________________________ ________________________________________________________________________； 步骤四中，通过向溶液中加入____________调节NaCl溶液的物质的量浓度至____________mol/L时，DNA将会析出，过滤去除溶液中的杂质。 (4)步骤七：向步骤六过滤后的____________中加入等体积的冷却的____________，静置2～3 min，溶液中会出现________色丝状物，这就是粗提取的DNA。 (5)步骤七：DNA遇____________试剂，沸水浴5 min，冷却后，溶液呈______色。 答案　(1)蒸馏水　(2)滤液　(3)DNA在不同浓度NaCl溶液中溶解度不同，通过控制NaCl溶液的浓度去除杂质　蒸馏水　0.14　(4)滤液　酒精　白　(5)二苯胺　蓝 解析　破碎红细胞应用蒸馏水，使之吸水涨破。DNA在不同浓度的NaCl溶液中溶解度不同，在2 mol/L的NaCl溶液中DNA溶解，在0.14 mol/L的NaCl溶液中DNA析出。可通过加入蒸馏水将2 mol/L的NaCl溶液稀释为0.14 mol/L的NaCl溶液。DNA不溶于冷酒精，遇二苯胺加热呈蓝色。 1．DNA与蛋白质在NaCl溶液中溶解度比较 2 mol/L NaCl溶液 0.14 mol/L NaCl溶液 溶解规律 DNA 溶解 析出 蛋白质 部分发生盐析沉淀 溶解 NaCl溶液从2 mol/L降低过程中，溶解度逐渐增大 2．DNA粗提取与鉴定中不同试剂的用途及原理比较 试剂 浓度 用途 原理(“△”为实验的主要原理)NaCl溶液 2 mol/L 溶解DNA DNA在NaCl溶液中的溶解度随溶液浓度的变化而改变，溶解度在2 mol/L时最大、在0.14 mol/L时最小 △ 0.14 mol/L 析出DNA 2 mol/L 鉴定时的溶剂 酒精 95%(体积分数) 除去杂质以提纯DNA DNA不溶于酒精，但是细胞中的某些物质可以溶于酒精 △ 二苯胺 鉴定剂 DNA遇二苯胺(沸水浴)会变蓝色 △ 柠檬酸钠 0.03 g/mL 抗凝剂 除去血液中的钙离子，防止血液凝固 3．DNA粗提取实验材料和方法的选择 (1)不同生物的组织中DNA含量不同 在选取材料时，应本着DNA含量高、材料易得、便于提取的原则。 (2)材料不同所采用的提取方法不同 ①植物组织：取材→研磨→过滤→沉淀。 ②鸡血：制备鸡血细胞液→提取核DNA→溶解细胞核内DNA→析出并滤取DNA→DNA再溶解→提取较纯净的DNA。 考点　PCR技术的基本操作和应用 1．PCR原理 DNA热变性原理，即： 2．PCR反应过程 (1)变性：当温度上升到90_℃以上时，双链DNA解聚为单链。 (2)复性：温度下降到55_℃左右时，两种引物通过碱基互补配对与两条单链DNA结合。 (3)延伸：温度上升到72 ℃左右时，溶液中的四种脱氧核苷酸(A、T、C、G)在DNA聚合酶的作用下，根据碱基互补配对原则合成新的DNA链。 易错警示　(1)DNA分子复制的人工控制 解开螺旋：在80～100 ℃时，DNA双螺旋打开，形成两条DNA单链，称为变性。 恢复螺旋：在50 ℃左右时，两条DNA单链重新形成双螺旋结构，称为复性。 复制条件：缓冲液、DNA模板、四种脱氧核苷酸、热稳定DNA聚合酶和两种引物。 反应场所：PCR仪。 (2)PCR