傅里葉变换红外光谱用于胆囊癌细胞及其细胞核结构的基础研究.docVIP

第29卷,第7期　　　 　光谱学与光谱分析　　　　　 　Vol.29,No.7,pp1750-1753 2009年7月　　　　 　Spectroscopy and Spectral Analysis May,2009 傅里叶变换红外光谱用于胆囊癌细胞及其细胞核结构的基础研究 孙学军1，孙丰雷1，杜俊凯1，潘庆华2，张元福2，徐怡庄2，石景森1*，吴瑾光2 1. 西安交通大学医学院第一附属医院普外科，陕西 西安710061 2. 北京大学化学与分子工程学院，北京100871 摘 要 应用傅里叶变换红外光谱（FTIR）对体外培养胆囊癌细胞、细胞核进行检测，对照胆囊癌组织光谱特征，研究胆囊癌细胞株及细胞核的光谱表现；为红外光谱法诊断胆囊癌奠定细胞学基础。应用美国Nicolet（尼高力）公司5700-Ⅱ型红外光谱仪，组织标本放置于OMNIC采样器表面进行检测，记录红外光谱；体外培养胆囊癌细胞株(GBC-SD)及提取的细胞核涂于欧米采样器表面进行红外检测,记录红外光谱，得到时间轴上体外培养细胞株及细胞核的光谱图；选择特征性光谱与胆囊癌组织光谱进行比对。结果发现胆囊癌细胞株红外光谱特征与相应癌组织光谱特征存在异同。从而可得出结论：将体外培养肿瘤细胞株及提取的肿瘤细胞核，进行FTIR测定是行之有效的细胞红外光谱检测手段，能得到体外培养细胞的红外谱图；胆囊癌组织所表现的红外光谱特征具有胆囊癌细胞本身的红外光谱特征，同时也具有组织自身的复杂特点；FTIR为应用于胆囊癌的定性诊断提供了更加丰富的细胞学基础。 关键词 傅里叶变换红外光谱；胆囊癌；细胞株；细胞核 中图分类号：O657.3 文献标识码：A DOI：10.3964/j.issn.1000-0593(2009)07-1750-04 引言 原发性胆囊癌是胆道系统最常见的恶性肿瘤，近年来发病率日益增高。该病缺乏典型的临床表现，一经发现多属中晚期，手术切除率低，术后5年生存率不到5％，而早期原发性胆囊癌术后5年生存率甚至可达100％。因此，早期诊断是提高疗效、改善预后的关键。 自1985年Benedetti等首次将傅里叶变换红外光谱用于白血病病人淋巴细胞的研究以来，该技术在肿瘤领域的研究日益受到人们的重视。红外光谱是分子结构的灵敏探针，能够在分子水平上对肿瘤进行研究，目前已经成为生物医学领域的热门话题。傅里叶变换红外光谱已用于宫颈癌、结肠癌、肝癌、皮肤癌、乳腺癌、口腔鳞状细胞癌、胃癌等组织的研究，并获得了一些有意义的信息；在细胞水平已有研究报道［1-4］，但在亚细胞结构研究未见有报告。而肿瘤细胞是肿瘤组织的主要组成成分，并决定着肿瘤的生物学特点，细胞恶变的一个重要特征就是由于DNA的大量复制而导致其在细胞核内含量增加，细胞核体积增大和核浓染是在HE染色光镜下判断其良恶性的重要指标，本实验应用傅里叶变换红外光谱对胆囊癌组织，细胞株及其亚细胞结构细胞核进行检测研究，期望为肿瘤组织的定性诊断提供更丰富的细胞学基础。 1材料和方法 收稿日期：2008-11-16 收稿日期：2008-11-16，修订日期：2009-02-18 基金项目：国家自然科学基金项目50673005和陕西省科学技术研究发展计划项目（2006K09-G8）资助 作者简介：孙学军，1965年生，西安交通大学医学院第一附属医院教授e-mail: sunxy@mail.xjtu.edu.cn *通讯联系人e-mail: shijingsen@ xjtu.edu.cn 所有组织标本为西安交通大学医学院第一附属医院外科手术切除的胆囊癌，征得患者家属同意，手术切除后立即取材。用无菌蒸馏水清洗干净标本后, 取大小为1cm×1cm×1cm的组织两块，均取自癌中心部位，一块放入液氮中冻存备用，一块用10％的福尔马林溶液固定，石蜡包埋，常规病理检测。 1.2胆囊癌细胞株的培养及其细胞核的制备 胆囊癌细胞株（GBC-SD）由西安交通大学医学院中心实验室提供。胆囊癌细胞放在RPMI1640培养液（含10％胎牛血清，青霉素和链霉素各100U·mL-1）中，置37℃，饱和湿度，5％ CO2的培养箱中进行培养，待细胞进入对数生长期后，收集细胞，应用细胞核制备试剂盒提取所需癌细胞核以备检测。 1.3仪器与检测方法 采用美国尼高力（Nicolet）公司生产的5700-Ⅱ FTIR光谱仪, 将培养细胞收集于离心管中，应用细胞核制备试剂盒分步提取所需的胆囊癌细胞核，将提取的细胞核放置于OMNIC采样器上，连续扫描32次