利用微生物處理秸秆的工艺研究陈漫20.docxVIP

微生物实验 姓名：陈漫 学号 班级：生工09-1 实验名称：利用微生物处理秸秆的工艺研究 实验日期：2011年12月21日~2011年12月30日（周期10天） 实验组员：秦晋、廖祥、宋遥、肖铁成、朱维康、陈漫、吴菡、黄舒雅 实验设计综述： 一、处理对象：秸秆（秸秆的生物结构） 我们小组使用的为玉米秸秆,玉米秸秆性状如下。 表1 玉米秸秆的化学成分含量表 主要化学成分 纤维素 半纤维素 木质素 蛋白质 含量百分比 38% 25% 25% 4%~6% 从秸秆的组成结构来看，纤维素是秸秆细胞壁的主要成分，也是秸秆的支持组织。纤维素是纤维二糖的高聚体，为直链扁带状分子结构，无分支。由于葡萄糖单位间依靠，β一1，4一 糖苷键相互作用，不能卷成螺旋状，纤维素分子链之间可以利用分子间氢键牢固地相互联接在一起，形成不溶于水的高分子。半纤维素是与纤维素、木质素共存于植物细胞壁中的一大类多糖，主要是木糖、阿拉伯糖、葡萄糖等单糖的聚合体，各自以共价键、氢键、酯键、醚键等相互作用，形成稳定的化学结构。 木质素基本上是由苯丙烷基单元(C6一C3)经C—C键和C—O键相互连接和无规则偶合而成的，是具有三维空间结构的复杂无定型非晶体高聚物，其中有4％的酸溶木质素，其余的成分极难被降解。秸秆中的木质素分子通过酯键与纤维素、半纤维素分子相结合，使三者牢固地缠裹在一起，这种结构使得玉米秸秆坚硬而且难于被降解，导致秸秆生物资源很难作为反刍动物饲料的直接碳源或能源被吸收，难以充分利用。 二、菌群的研究： 我们小组选用产甲烷菌群，产甲烷菌性能如下。 产甲烷菌群的分离大多数来自以下三种环境： 1、水沉积物、沼泽、苔原、稻田、腐败的树木心材及厌氧污泥消化器 2、瘤胃、盲肠和肠 3、地热温泉、洋脊、热液喷口和非洲的基伍湖 产甲烷均是一类能够将无机/有机化合物经过厌氧发酵转化成为甲烷、CO2的严格发酵过程，产甲烷菌群是一类水生古生菌，其细胞壁内含有假肽聚糖，可以用溶菌酶/青霉素来筛选得到纯种。 4、产甲烷菌群：厌氧产甲烷菌（枯草芽胞杆菌12. 1% ，克鲁斯假丝酵母10%，地衣芽胞杆菌27. 2% 、变色栓菌10. 6% 、黄孢原毛平革菌40%） 三、厌氧发酵过程和发酵条件： ① 微量元素对沼气发酵有促进作用，如铁、锌、钴铜等 ② 产甲烷发酵的最适条件：pH:6 ~ 8 ,温度：30 ~35℃, TS%：6% ~ 12%, 接种量：5% ~ 15% 四、厌氧发酵的三大技术： 1、厌氧手套箱、 2、 厌氧发酵罐、 3、亨盖特滚管技术、 五、发酵底物的处理： 主要化学成分 纤维素 半纤维素 木质素 蛋白质 含量百分比 38% 25% 25% 4%~6% 我们在发酵过程中能运用的底物多数为纤维素、半纤维素，但是在玉米秸秆中还含有25%的木质素，而木质素在厌氧发酵中不能被降解，所以要对发酵残渣进行在处理。 木质素的处理有物理法、化学法、生物法。 由于物理法和化学法处理过程中耗能较高，且易污染环境，所以现在大多数都使用生物法处理。 利用放线菌降解木质素：链霉菌假单胞杆菌、巨大芽孢杆菌。 实验创新点： 产甲烷菌的分离纯化培养及其培养基对于菌株的选择作用 利用PB实验确定最优工艺条件 利用微生物的互生关系和协同作用 在发酵液上用一层油或其他小密度溶液将其液封 利用活动量筒法对气体进行收集 反应底物可进行二次降解提高原料利用率 实验方案： 、实验目的： 1. 产甲烷菌7684筛选、分离和纯化、 2．研究产甲烷菌的产气机理进行，包括：pH、温度、接种量/%及TS/%(底物固体浓度)产气条件、 3. 利用限制性培养技术，研究产甲烷菌的产气最适条件、 4. 对初始条件产气速率作图分析，得到最适条件、 5. 利用最适条件做正交实验，作出实验数据正交图，分析实验数据 ，找到厌氧产气复合最优条件。 （二）、实验仪器和试剂： ① 仪器：100ml量筒一个、500ml量筒一个、恒温水浴锅（35℃ ② 试剂：玉米秸秆、氯化铵、菌种原液（工厂废弃液） 装置1：秸秆粉 Ts 40g ,加入1LTs 为15g 活性污泥（4%）。 装置2：秸秆粉 Ts 20g ,加入1LTs为15g 的活性污泥（4%） 装置3： 秸秆粉 Ts 20g ,加入NH4Cl 70mg/L ,再加入1LTs为15g 的活性污泥（4%）。 装置图③： （三）、实验步骤： 配置液体培养基，利用湿热灭菌法对培养基进行灭菌 在厌氧手套箱中进行菌种的接种（扩大培养和接种实验） 进行PB实验： （1）对底物浓度(8%)、pH 、接种量(10%)进行控制，对温度进行PB实验：20℃ 、25 ℃、3