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动物医学专业论文-犬猫病毒病临床诊断技术研究进展 动物医学分会论文选－－犬猫病毒病临床诊断技术研究进展 一、免疫胶体金技术在犬猫病毒病诊断中的应用（一）免疫胶体金技术的基本原理免疫胶体金技术的检测原理是以硝酸纤维膜为载体，包被已知抗原或抗体，加入待检样品后，样品中的抗体或抗原与膜上包被的抗原或抗体结合，再通过胶体金标记物与之反应形成红色的可见结果，从而达到检测目的。试纸条上依次粘有A：吸水纸；B：玻璃纤维膜，膜上吸附着金标记物；C：硝酸纤维素膜（nitrocellulose membranes, NCM），根据需要在膜上包被不同的抗体（或抗原），并使其呈带状分布，作为检测线和质控线；D：吸收垫。ABCD首尾相连，当液体标本滴加在A上时，液体即向D处不断扩散，当液体到达B处时，金标记物被溶解，同时与标本中的抗原反应而形成复合物。液体继续前移至C处，金标记的复合物再与膜上检测线的抗体结合而呈现红色的线条，多余的金标抗体继续前移至D处。利用胶体金试纸检测的方式既可以标记抗体，又可以标记抗原；既可以采用标记抗原与待测抗原的竞争方式来检测抗体，又可以利用标记抗体或标记二抗的双抗体夹心法方式来检测抗原。目前，该项技术已在医学上得到广泛的应用，大多数人的传染病都已经研制成免疫胶体金检测方法。在兽医诊断领域也已开始使用，如犬细小病毒、犬瘟热病毒临床快速诊断均已开始使用免疫胶体金快速诊断试纸条。（二）免疫胶体金诊断技术的特点1、免疫胶体金技术的优点① 亲和性好（特异性好、灵敏度高），准确性高；② 稳定性好，批内/批间差小，易于质量控制；③ 示踪剂：已胶体金为指示剂，本身形成免疫分析过程后的颜色标记；④ 操作简便；⑤ 符号显示结果；⑥ 单体操作；⑦ 无需设备、仪器；⑧ 摆脱冷链，易运输、储藏；⑨ 自带质控对照；⑩ 经济实用。2、免疫胶体金技术的缺点① 灵敏度不如ELISA（仅相对于酶标而言，而酶有生物活性，故有第二批放大过程，使ELISA产品较金标法产品更为灵敏）；② 一般作为定性，不易定量；③ 若ELISA采用自动化分析仪时，大批量的集约性的操作，不如ELISA快而方便。（三）免疫胶体金诊断技术在犬猫病毒病诊断中的应用1、目前在我国兽医临床的应用情况胶体金试纸条作为诊断试剂应用于兽医临床，由于它快速、准确，具有高度特异性和敏感性，结果直观可靠，而且试剂和样品用量极少，无需仪器设备，简化了繁琐的常规操作过程，同时也减少了因操作引起的误差。虽然在动物医学方面的研究起步较晚，但已经引起兽医界的重视，现在已有用于动物疫病检测的胶体金试纸条面市。如用于检测猪瘟抗体的免疫金标试纸条，检测鸡传染性法氏囊病病毒的免疫金标试纸条以及检测犬细小病毒、犬瘟热病毒的免疫金标试纸条等。可以预见在未来的兽医临床，免疫胶体金技术的应用一定会更加广泛。2、犬细小病毒免疫金标试纸条的临床应用（1）样品采集与制备取病犬的粪便样品1g，加生理盐水5ml，充分摇匀后静置5分钟。（2）操作方法室温下将试纸条水平放置，取上清液3~5滴，逐滴缓慢滴入试纸条的加样孔（S）内，静置20~30分钟，观察结果。（3）结果判定阳性：试纸在C和T区位置出现两条平行的紫红色（或红色）线；阴性：试纸只在C区位置出现一条紫红色（或红色）线；无效：试纸不出现任何紫红色（或红色）线。（4）注意事项为确保检测结果准确，请严格按照说明书操作；试纸只能使用一次，请勿重复使用；试纸取出后应在15分钟内使用；包装袋子损坏或密封破损时，请勿使用此袋中的试纸；请勿将不同批号的试纸及其试剂混合使用。二、ELISA技术在犬猫病毒病诊断中的应用免疫测定（immunoassay，IA）是应用免疫学技术测定样品的方法。在临床诊断中主要通过抗原抗体反应检测体液中的抗原或抗体性物质。用酶标记物进行免疫学检测的方法称为酶免疫测定（enzyme immunoassay，EIA），是继放射免疫测定技术之后发展起来的一种免疫测定技术。EIA技术诞生于70年代初,以后被称为酶联免疫吸附试验（enzyme linked immunosorbentassay, ELISA）。目前，该项技术已在兽医学上得到广泛的应用，大多数动物传染病都已经研制成ELISA检测方法，在犬猫病毒病诊断中也得到广泛应用。（一）ELISA的基本原理ELISA的基础是抗原或抗体的固相化及抗原或抗体的酶标记。结合在固相载体表面的抗原或抗体仍保持其免疫学活性，酶标记的抗原或抗体既保留其免疫学活性，又保留酶的活性。在测定时，受检标本（测定其中的抗体或抗原）与固相载体表面的抗原或抗体起反应。用洗涤的方法使固相载体上形成的抗原抗体复合物与液体中的其他物质分开。再加入酶标记的抗原或抗体，也通过反应而结合在固相载体上。此时固相上的