吸入異氟烷对大鼠肺表面活性蛋白-A(SP-A)的影响.docVIP

吸入异氟烷对大鼠肺表面活性蛋白-A（SP-A）的影响 李志红1 杨拔贤2 安海燕2 （1 北京肿瘤医院麻醉科，北京，100036；2北京大学人民医院麻醉科，北京，100044） 摘 要 目的 观察大鼠吸入不同浓度异氟烷时，肺表面活性蛋白-A(SP-A)的含量及其基因表达的改变。 方法 雄性Wistar大鼠104只随机分为5组：组1，空白对照组（Con，n=8）；组2，40% O2对照组（40% O2，n=24）；组3，0.7%异氟烷组（0.7%Iso，n=24）；组4，1.5%异氟烷组（1.5%Iso，n=24）；组5，2.0%异氟烷组（2.0%Iso，n=24）。其中组2吸入40% O2，组3、4、5大鼠分别吸入设定浓度的异氟烷（载气为40%O2）。除空白对照外，其余各组再分为三个亚组：4小时组（4hr，n=8）、8小时组（8hr，n=8）和10小时组（10hr，n=8）。4hr和8hr亚组分别吸入各组气体4小时和8小时，组2中10hr亚组吸入40% O2 10小时，3、4、5组中10hr亚组分别吸入设定浓度异氟烷8小时，停药后再吸入40% O2两小时。于设定时间点迅速处死实验大鼠，取肺组织透射电镜观察肺泡Ⅱ型上皮细胞结构变化；检测支气管肺泡灌洗液中SP-A的含量（Western Blot）；Ⅱ型上皮细胞中SP-A的含量（IHC）；以及SP-AmRNA的表达（RT-PCR）。 结果 1．40%O2组中各亚组的各项指标与Con组均无显著差异。 2．透射电镜观察肺泡Ⅱ型上皮细胞结构：吸入异氟烷后，0.7%Iso组肺泡Ⅱ型上皮细胞形态学无明显改变；1.5%Iso组和2.0%Iso组的肺泡Ⅱ型上皮细胞可见明显形态学改变，尤以8hr亚组明显。 3．支气管肺泡灌洗液（BALF）中SP-A的含量：0.7%Iso组中4hr亚组外，各吸入异氟烷组大鼠的BALF中SP-A的含量均较Con组显著下降(p0.01)；1.5%Iso组和2.0%Iso组中8hr亚组较0.7%Iso组8hr亚组下降更明显（p0.01）。各组内不同亚组间的比较可见：0.7%Iso组中8hr、10hr亚组较Con组明显下降（p0.01），但两亚组间无明显差别；1.5%Iso组与2.0%Iso组中各亚组均明显低于Con组（p0.01），各亚组间也未见明显区别。 4．免疫组化检测肺Ⅱ型上皮细胞中SP-A的含量：1.5%Iso组与2.0%Iso组肺泡Ⅱ型上皮细胞中SP-A的含量明显下降，而0.7%Iso组较Con组无明显变化。 5．肺组织匀浆中的SP-AmRNA含量：吸入异氟烷的各组中，0.7%Iso 组SP-AmRNA的含量与Con组、40%O2组均无明显差异；1.5%Iso与2.0%Iso组中4hr、8hr亚组SP-AmRNA的表达均明显低于Con组、40%O2组和0.7%Iso 组中相应的亚组，有统计学差异（p0.01），各组的10hr亚组均恢复至Con组水平。 结论 吸入1.5%或更高浓度的异氟烷4小时以上，可降低大鼠肺组织SP-A的基因表达和蛋白合成，并可能影响其分泌和再摄取。停止吸入异氟烷2小时后，大鼠肺组织SP-A的基因表达可恢复至正常水平，但蛋白合成需更长时间才能恢复。 ［关键词］异氟烷；肺表面活性蛋白-A（SP-A）；基因表达 异氟烷（isoflurane，Iso）由于具有安全、低毒和可控性好等优点，而成为目前临床最常用的吸入麻醉药。但是，其对呼吸系统，尤其是对肺泡上皮细胞的不良影响也已为人们所重视。有动物实验表明，异氟烷可以降低肺表面活性物质(pulmonary surfactant, PS)的合成（包括磷脂和蛋白），增加肺部的炎性反应并降低肺部的防御机制，［1-5］　是引起术后肺部并发症(如肺不张、肺部感染等)的影响因素之一。而肺表面活性蛋白-A（surfactant protein A, SP-A）是肺表面活性物质中含量最多，与PS的合成和分泌密切相关的一种蛋白质，并对PS的生理功能和肺自我防御机制起到重要作用［6-7］。有研究表明，大鼠吸入较高浓度异氟烷时，支气管肺泡灌洗液中的SP-A浓度下降。［8］异氟烷还可使培养的正常Ⅱ型肺泡上皮细胞内和培养液中SP-A的含量降低。［5］　然而，吸入异氟烷引起上述改变发生在哪一水平，目前还未见明确报道。因此，本实验研究拟通过检测吸入不同浓度异氟烷大鼠的支气管肺泡灌洗液(broncho-alveolar lavage fluid, BALF)和肺组织中SP-A的含量，以及肺组织中SP-AmRNA含量的变化，来探讨异氟烷对肺内SP-A的合成、分泌与基因表达的影响。 材料与方法 (一)实验动物: 健康成年Wistar大鼠104只，体重200±10g，由中国人民解放军军事医学科学院实验动物中心提供，于北