高效液相色谱—串联质谱法测定人体内30种氨基酸.docVIP

高效液相色谱—串联质谱法测定人体内30种氨基酸 　　摘 要：建立了以12种同位素标记氨基酸做内标，采用衍生化方法，LC-MS/MS采用MRM方式同时定量30种氨基酸的检测方法。生物样本加入含有同位素内标的甲醇溶液，沉淀蛋白后氮气吹干加入衍生试剂，样本氨基酸与同位素氨基酸内标同步衍生，减小实验误差。选用TC-C18色谱柱，以水-乙腈（均含有0.01%七氟丁酸和0.1%甲酸）为流动相，采用梯度洗脱进行分离，30种氨基酸及其中的同分异构体都能基线分离。选用3200QTRAP型质谱仪的多重反应监测（MRM）扫描方式进行检测。本方法用于实时监测恶性血液病患者血浆氨基酸谱的变化，可以直接反映机体的代谢及营养状况，对患者的移植成功率及改善移植后患者的生存质量均有重要意义。 　　关键词：高效液相色谱-串联质谱；氨基酸；高通量定量；同位素内标；恶性血液病 　　1 引 言 　　氨基酸是生命的基石，是人体基本营养物质，也是蛋白质的组成单位。生命的产生、存在和消亡，均与蛋白质有关，而氨基酸是蛋白质的基本单位，如果人体缺乏氨基酸，就会导致生理功能异常，影响机体代谢的正常进行，导致疾病。检测复杂样本中氨基酸的含量对临床和科研等都具有重要意义。 　　目前，氨基酸检测技术繁多，1958年Spackman等首先提出了用阳离子交换色谱与柱后茚三酮衍生结合的方法分析蛋白质中的氨基酸[1]， 实现了氨基酸分析的自