内蒙古自治区人感染H7N9禽流感讲解.doc

内蒙古自治区人感染H7N9禽流感 病毒实验检测技术方案 人感染H7N9禽流感是由H7N9亚型禽流感病毒引起的急性呼吸道传染病。禽流感病毒属正粘病毒科甲型流感病毒属。禽甲型流感病毒颗粒呈多形性，其中球形直径80～120nm，有囊膜。基因组为分节段单股负链RNA。依据其外膜血凝素（H）和神经氨酸酶（N）蛋白抗原性不同，目前可分为16个H亚型（H1～H16）和9个N亚型（N1～N9）。禽甲型流感病毒除感染禽外，还可感染人、猪、马、水貂和海洋哺乳动物。可感染人的禽流感病毒亚型为H5N1、H9N2、H7N7、H7N2、H7N3，此次发生的为人感染H7N9禽流感病毒。该病毒为新型重配病毒，其内部基因来自于H9N2禽流感病毒。 禽流感病毒普遍对热敏感，对低温抵抗力较强，65℃加热30分钟或煮沸（100℃）2分钟以上可灭活。病毒在较低温度粪便中可存活1周，在4℃水中可存活1个月，对酸性环境有一定抵抗力，在pH4.0的条件下也具有一定的存活能力。在有甘油存在的情况下可保持活力1年以上。 一、人感染H7N9禽流感临床标本的采集、运送、处理 （一）临床标本采集 医疗机构应当及时采集病例的相关临床标本。采集的临床标本包括病人的上呼吸道标本（包括咽拭子、鼻拭子、鼻咽抽取物、咽漱液和鼻洗液）、下呼吸道标本（如气管吸取物、肺洗液、肺组织标本）和血清标本等。应当尽量采集病例发病早期的呼吸道标本（尤其是下呼吸道标本）和发病7天内急性期血清以及间隔2-4周的恢复期血清。如病人死亡，应当尽可能说服家属同意尸检，及时进行尸体解剖，采集组织（如肺组织、气管、支气管组织）标本。并填写不明原因肺炎病例/聚集性病例标本送检表和不明原因肺炎病例调查表（见附表1和表2）。 病毒分离成功与否很大程度上取决于临床标本的采集时间、质量及其保存和运输等环节。标本采集后应立即放入适当的采样液中低温保存。常用的采样液有以下三种：pH7.4～7.6的Hanks、Eagles或者DMEM培养基。为防止采样液生长细菌和真菌，在采样液中可加入抗菌素，加入庆大霉素（终浓度为1mg/ml）和/或制霉菌素（终浓度为50U/mL）。加入抗菌素以后重新调节pH值至7.4，分装每个采样管3mL，-20℃冻存。常用采样方法有以下几种： 1.鼻拭子：将带有聚丙烯纤维头的拭子平行于上颚插入鼻孔，旋转，保持数秒，待拭子头吸收分泌物以后，缓慢转动退出。以另一拭子拭另侧鼻孔。将拭子头浸入采样液中，弃去尾部。 2.咽拭子：用带有聚丙烯纤维头的拭子适度用力擦拭双侧扁桃体及咽后壁，应避免触及舌部。同样将拭子头浸入采样液中，弃去尾部。 （注：亦可将鼻、咽拭子收集于同一采样管中，以便提高分离率，减少工作量）。 3.鼻咽抽取物：用与负压泵相连的收集器从鼻咽部抽取粘液先将收集器头部插入鼻腔，接通负压，旋转收集器头部并缓慢退出。收集抽取的粘液，并用3～5mL采样液涮洗收集器3次。 4.血清：标本采集应该包括急性期和恢复期双份血清，单份血清不能用作诊断。急性期血样应尽早采集，可在采集病毒分离标本的同时采集，但不能晚于发病后7天。恢复期血样则在发病后2～4周采集。一般采集空腹血。 （1）取一根体积5mL以上，无菌的血清管做好标记，并进行登记。登记的内容包括：医院名称、患者姓名、性别、急性期或恢复期、采样日期（年，月，日）。 （2）从患者手臂静脉采5mL血，放入准备好的上述血清管中。 （3）放置于室温数小时待血液完全凝固。 （4）1500～2000rpm离心10min，收集血清于无菌管中，做好标记。 （二）临床标本运输和保存 H7N9禽流感病毒实验室活动和样本运输按照《人间传染的病原微生物名录》中高致病性禽流感病毒进行管理。病例的临床标本采集后，旗县级疾病预防控制机构和病例收治的医疗机构要密切配合，按照《可感染人类高致病性病原微生物菌（毒）种或样本运输管理规定》进行包装，在24小时内送到当地流感监测网络实验室进行检测。 临床标本采集管建议使用带螺口的塑料管。运输时在包装箱内填充吸水材料，运输过程中保持标本采集管直立状态，不能倾斜。 （三）送检标本的接收 送检的标本（毒株）送到实验室后，由专人在生物安全柜内打开标本的包装，记录收检日期、送检实验室名称、核对并记录送检标本（毒株）编号是否与送检单相同。 （四）临床标本处理 为避免标本反复冻融，保证标本检测质量，采集的呼吸道标本每份分为3管，每管不少于1ml。血清标本每份分为2管，每管不少于0.5ml。 临床采集标本送至实验室后，须经处理后再进行病毒相关检测。若为带有聚丙烯纤维的拭子标本，应先将带有聚丙烯纤维的拭子在管壁反复挤压后取出。 鼻咽抽取液：用干净灭菌的毛细吸管在无菌条件下反复吹打收集的溶液，以便打碎粘液，置4℃待其自然沉淀5～10min，取上清。上清液可直接接种或低温保存。 组