学号：131470907 姓名：alex 班级：2010级药物制剂.docVIP

分类号： 学校代码：10392 学号：1314709007 福建医科大学 本科生毕业论文 基于核酸适配体-DNA长链结构的ATP传感器的构建 Construction of ATP sensor aptamer long chain structure based on -DNA 所 在 学 院：药学院 学 生：柴智强 指 导 教 师：翁少煌 研究起止日期：2014年1月至6月 二○一四年六月 目录 目录 1 英文缩写字表 2 中文摘要 2 第一部分 前言 5 第二部分 实验方法与结果 6 1.实验仪器与试剂 6 1.1主要仪器 6 1.2 主要试剂和材料 7 1.3 溶液配制 8 2.实验方法 9 2.1实验原理 9 2.2实验流程 10 2.2.1 杂交反应 10 2.2.2 荧光测定 10 3.实验结果与讨论 11 3.1 方法的可行性分析 11 3.3实验测定条件的选择 11 3.3.2不同的反应时间所测得荧光强度 12 3.3.3工作液用量对体系荧光强度的影响 12 3.3.4 不同反应温度所测得的荧光强度 13 3.4目标DNA杂交线性及检测限 16 3.5结论 18 参考文献 19 致 谢 19 英文缩写字表 英文缩写 英文全称 中文 SG I SYBR Green I I型绿色SYBR ssDNA single sequence DNA 单链DNA dsDNA double sequence DNA 双链DNA P-1 Probel-1 一号探针 P-2 Probel-2 二号探针 TE Tris-EDTA Tris-EDTA缓冲液 F Fluorescence intensity 荧光强度 ATP Adenosine triphosphate 三磷酸腺苷 中文摘要 本文中，应用核酸染料SYBR Green I(SGI)和ATP适配体建立荧光型传感器用于ATP浓度的测定。该方法是基于SGI可嵌入双链DNA（该双链DNA是ATP适配体杂交而来）中而产生强烈的荧光，SGI游离时不能产生荧光或荧光非常弱，而与双链DNA嵌合时才能产生强烈的荧光。这种嵌合体可与不同浓度的ATP发生反应，破坏了DNA的双链结构，进而使SGI游离出来，从而导致荧光减弱，利用该原理可以测定ATP的浓度。在优化的实验条件下，荧光信号的减弱比（F-F0）/F0 与不同的ATP浓度在10~5000 μM浓度范围内呈良好的线性关系，线性方程为Y=1.11928+0.0014*X R=0.9964，检测限为6.12 μM。该方法对液体环境中ATP的定量检测显示出良好的选择性和较高的灵敏度。 Abstract In this paper, the application of nucleic acid dye SYBR Green I (SG I) and ATP aptamer based fluorescence sensor for determination of ATP was developed. SGI can embed into double stranded DNA (based on the double stranded DNA is ATP aptamer hybrids from) and produce strong fluorescence, SG I the dye free cannot produce fluorescent or fluorescence is very weak, and produce strong fluorescence and to double stranded DNA chimeric, this chimera can react with different concentrations of ATP, destroying the double chain structure of DNA, and the SG I free, leading to fluorescence decrease, concentration of the theory can be determined for various environment ATP. Under the optimized experimental conditions, the fluorescence signal weakening ratio (F-F0) of /F0 and different ATP concentrat