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实验16 酶的特异性和影响酶反应速度的因素 一、目的 1、了解酶的特异性。 2、了解温度、pH值、激活剂和抑制剂等因素对酶反应速度的影响。 3、掌握检查酶的特异性，酶的激活剂和抑制剂影响酶反应速度的方法及原理。 4、学习测定酶最适pH值的方法。 二、原理 酶是生物体中具有催化功能的蛋白质，因此也叫生物催生剂。生物体内存在多种多样的酶，从而使生物体在温和的条件下能迅速完成复杂的生物化学反应。 酶具高度的特异性。所谓特异性是指一种酶能对一种化合物或一类化合物起催化作用，而不能对别的物质发生催化反应。 淀粉和蔗糖无还原性。唾液淀粉酶水解溶粉生成有还原性的麦芽糖，但不能催化蔗糖水解。蔗糖酶能催化蔗糖水解产生还原性的葡萄糖和果糖，但不能催化淀粉水解，用Benedict试剂检查糖的还原性。 温度和pH对酶的活性有显著的影响，使反应速度达最大反应值时的温度称为某种酶作用的最适温度。大多数动物酶的最适温度为37℃~40℃，植物酶的最适温度为50℃ 酶的活性常受某些物质的影响，能使酶活性增加的物质称为酶的激活剂，能使酶的活性降低的物质称为酶的抑制剂。氯离子为唾液淀粉酶的激活剂，铜离子为其抑制剂。 三、材料、试剂与器具 （一）材料 1、干酵母 2、黄豆粉 （二）试剂 1、2%蔗糖溶液：蔗糖是典型的非还原糖，若商品蔗糖中还原糖含量超过一定标准，则呈现还原性，这种蔗糖不能使用，所以实验必须进行检查，本实验用的蔗糖至少应是分析纯的试剂。 2、0.3%氯化钠的1%淀粉溶液（新配制）。 3、释释200倍的新鲜唾液（5滴唾液，加蒸馏水稀释至50毫升）。 4、蔗糖酶溶液：取干酵母100克，置于乳钵内，加适量的蒸馏水和少量石英砂，用力研磨提取1小时，再加蒸馏水使总体积约500毫升，过滤，将滤液保存于冰箱备用。 5、本尼迪克特试剂（Benedict）：将硫酸铜17.3克溶于100毫升热蒸馏水中，冷却，稀释至150毫升，取柠檬酸钠173克及无水碳酸钠（Na2CO3）100克 6、0.1%淀粉溶液。 7、1%氯化钠溶液。 8、1%硫酸铜溶液 9、1%的硫酸钠溶液 10、碘化钾—碘溶液（稀）。 11、0.3%氯化钠0.2%淀粉溶液。 12、1%尿素溶液 13、脲酶提取液：取黄豆粉6克，加30%乙醇250毫升，振荡10分钟，过滤，可保存1~2星期。 14、奈斯勒试剂：称取5克碘化钾，溶于5毫升蒸馏水中，加入饱和氯化汞溶液（100毫升约溶解5.7克氯化汞）并不断搅拌。直至产生的朱红沉淀不再溶解时，再加40毫升50%氢氧化钠溶液，稀释100毫升，混匀，静置过夜，倾出清液于棕色瓶中。 15、0.3%氯化钠的0.5%淀粉溶液（新配制） 16、0.2M磷酸氢二钠溶液 17、0.1M柠檬酸溶液 （三）器具 1、试管及试管架 2、移液管（1，2，5毫升） 3、冰浴 4、恒温水浴 5、白瓷板 6、秒表 四、操作步骤 （一）酶的特异性 1、淀粉酶的特异性实验 取试管6支，编号，按下表进行操作 管号 1 2 3 4 5 6 1%淀粉溶液（滴） 4 4 4 2%蔗糖溶液（滴） 4 4 4 稀释唾液（ml） 1 1 煮沸过的稀释唾液（ml） 1 1 蒸馏水（ml） 1 1 37℃ Benedicty试剂（ml） 2 2 2 2 2 2 沸水浴2~3分钟 现 象 解释结果 2、蔗糖酶的特异性实验 取试管6支，编号，按下表进行操作 管 号 1 2 3 4 5 6 1%淀粉溶液（滴） 4 4 4 2%蔗糖溶液（滴） 4 4 4 蔗糖酶溶液（ml） 1 1 煮沸过的蔗糖酶溶液(ml) 1 1 蒸馏水（ml） 1 1 37℃ Benedict 试剂(ml) 2 2 2 2 2 2 沸水溶2-3分钟 现 象 解释结果 （二）酶的激活剂及抑制剂 取试管4支，编号，按下表加入试剂 管 号 1 2 3 4 0.1%淀粉溶液（ml） 3 3 3 3 稀释唾液(ml) 1 1 1 1 1%硫酸铜溶液(ml) 1 1%氯化钠溶液（ml） 1 1%硫酸钠溶液(ml) 1 蒸馏水(ml) 1 37℃ 碘化钾——碘溶液（滴） 2~3 2~3 2~3 2~3 现象 解释结果 说明本实验第3管的意义。 （三）温度对酶活性的影响 1、温度对唾液淀粉酶活性的影响 唾液淀粉酶可将淀粉逐步水解成各种不同大小分子的糊精及麦芽糖。它们遇碘各呈不同的颜色。直链淀粉（即可溶性淀粉）遇碘呈蓝色，糊精按分子从大到小的顺序遇碘可呈蓝色、紫色、暗褐色和红色，最小的糊精和麦芽糖遇碘不呈颜色。由于不同温度下唾液淀粉酶的活性高低不同，则淀粉被水解的程度不同。所以，可由酶反应混合物遇碘所呈现颜色来判断。 取3支试管，编号后各加0.3%氯化钠的0.2%的淀粉溶液2毫升。将第1、2号试管放入37℃恒温水浴中保温，第3号试管放入冰水中冷却，5分钟后，向第