實验十细菌常用生理生化反应实验培养基的制备.docVIP

实验十　细菌常用生理生化反应实验培养基的制备 生物科学 贺冰冰 040012010025 周二 9、0 节 一、实验目的： 1 熟习生理生化反应培养基的配制原理和一般方法步骤 2 熟悉高压蒸汽灭菌的原理方法 ３　为生理生化反应实验准备培养基 二、培养基配方： 1、葡萄糖蛋白胨水培养基（用于 V. P. 反应和甲基红试验）：蛋白胨 0.5g，葡萄糖0.5g，K2HPO40.2g, 水1000mL，pH7.2，115℃ 2、 蛋白陈水培养基（用于吲哚试验）：蛋白胨10g，NaCl 5g，水1000mL，pH7.2-7.4，121℃ 3、 硫化氢实验培养基：蛋白胨 10g， NaCl 5g，牛肉膏 10g，柠檬酸铁铵 5g,硫代硫酸钠, 5g, 蒸馏水 1000mL，pH 7.0～7.4，分装试管，每管高度 4～5cm。 11５℃ 4、 硝酸盐还原培养基：蛋白胨 10g， NaCl 5g， KNO3（分析纯）1～2g，蒸馏水1000mL，pH7.4，分装小试管， 121℃ 5、 柠檬酸盐培养基：NH4H2PO4 1g，K2HPO4 1g，NaCl 5g，MgSO4·7H2O 0.2g，柠檬酸钠 2g，琼脂 15-20g，蒸馏水 1000mL，1%溴麝香草酚蓝酒精液 10mL。将上述各成分加热溶解后，调pH6.8，然后加入指示剂，摇匀。制成后为黄绿色，分装试管，112℃ 6、 富氏明胶培养基： NaCl 5g，K2HPO4 1.5g，KH2PO4 0.5g，明胶 4.0g，蛋白胨 0.1g，牛肉膏 5g，琼脂 15-20g，葡萄糖 0.05g，蒸馏水 1000mL，pH7.2，115℃ 7、 淀粉培养基：蛋白胨 10g，NaCl 5g，牛肉膏 5g，可溶性淀粉 2g，蒸馏水 1000mL，琼脂 15-20g，121℃ 8、 葡萄糖发酵培养基：蛋白胨 10g，NaCl 5g，葡萄糖 10g,蒸馏水 1000mL，琼脂 5g, pH7.4，加1%溴甲酚紫指示剂至紫色, 115℃ 三、实验器材： 1、 药品和试剂：牛肉膏、蛋白胨、NaCl 、 1NHCl、1NNaOH溶液等。 2、 器材：小烧杯、1000mL不锈钢杯、电炉、天平、牛角匙、玻棒、pH试纸、试管、分装漏斗、棉塞、三角瓶、橡皮圈。 3、 高压灭菌锅 四、实验方法： １葡萄糖蛋白胨水培养基(液体培养基,配200毫升,分装20支大试管): 换算---称量---溶解---调pH值---分装大试管20支---盖帽---包扎---待灭菌(115℃ 2 糖蛋白胨水培养基(液体培养基, 配200毫升,分装20支大试管): 换算---称量---溶解---调pH值---分装大试管20支---盖帽---包扎---待灭菌(121℃ 3 硫化氢实验培养基(配200毫升,分装20支小试管): 换算---称量---将蛋白胨琼脂溶解---稍冷加入其它成分---调pH值---分装小试管20支---盖帽---包扎---待灭菌(115℃ 4 硝酸盐还原实验培养基(液体培养基,配200毫升,分装20支小试管): 换算---称量---溶解---调pH值---分装小试管20支---盖帽---包扎---待灭菌(121℃ 5 柠檬酸盐培养基(固体斜面, 配200毫升,分装20支大试管): 换算---称量---溶解---调pH值---加溴麝香草酚蓝指示剂---分装大试管20支---盖帽---包扎---待灭菌(121℃ 6 富氏明胶培养基(制备固体平板,配200毫升,装入500毫升三角瓶中,制8-10个平板): 换算---称量---先将明胶溶解再溶解其它成分---调pH值---装入500毫升三角瓶中---加棉塞---包扎---待灭菌(115℃ 7 淀粉培养基(制备固体平板,配200毫升,装入500毫升三角瓶中,制8-10个平板): 换算---称量---先将淀粉溶解再溶解其它成分---调pH值---装入500毫升三角瓶中---加棉塞---包扎---待灭菌(121℃ 8 葡萄糖发酵培养基(半固体培养基,配200毫升,分装20支小试管)： 换算---称量---溶解---调pH值---加溴甲酚紫指示剂---分装小试管20支---盖帽---包扎---待灭菌(115℃ 灭菌: 按不同培养基的要求将培养基灭菌. 灭菌后将柠檬酸盐利用培养基摆斜面，其余垂直放置，收于实验台柜中． 五、思考题： 1 配置各种生理生化培养基时,分别应当注意什么事项? 答：各个物质添加后要完全溶解（如果有琼脂的话要加热比较久）在水中，调节pH到合适的范围，然后灭菌。灭菌后分装或者铺平板的时候要在洁净操作台上进行，避免再次污染。如果需要添加抗生素，一定要在灭菌后，冷却到大约五六十度的时候加。 2 配培养基时，为什么要先调好pH值在加指示剂？答：通常会