124洋地黄生测定法-中国药品检验标准操作规范2010年版.doc

洋地黄生物测定法 鸽法 1 试验材料及用具 1.1 天平 精度 0.1mg 标准品或供试品称量用 精度 1mg 试管称量用 精度 1g 鸽称重用 1.2 离心机 1.3 振荡机 1.4 灌注装置 包括滴定管架、滴定管夹、酸式滴定管（15ml，精度0.02ml）、连接用玻璃管及胶管、螺旋夹、针管头（1ml）、弯针头或小儿头皮针。 1.5 实验用具 鸽固定板、大夹子、容量瓶、带塞玻璃小瓶、烧杯、量筒、吸管、移液管、脱脂棉、滤纸、计时器。 1.6 手术用器械 手术剪、眼科镊、直镊、止血镊。 1.7 试剂 乙醇、氯化钠。 2 溶液配制 2.1 76%乙醇 95%乙醇与水（4:1）。 2.2 生理盐水 称取氯化钠适量，加水配成0.9%溶液。 2.3 标准品溶液 2.3.1 取洋地黄标准品，放置至室温。 2.3.2 割开安瓿（注意勿使玻屑掉入）迅速精密称量，置玻璃容器内。 2.3.3 将称得的克数，乘以标示单位数，得总单位数。 2.3.4 精密加76%乙醇，配成1.0U/ml溶液，密塞。 2.3.5 连续振摇1h，静置片刻过滤或离心，溶液贮于适宜容器中，密塞。置4~8℃保存备用。如无沉淀析出可在1个月内使用。 2.4 标准品稀释液 2.4.1 试验当日，取标注品溶液放置至室温。 2.4.2 精密量取适量，用生理盐水稀释，浓度应调节适当（一般可用1→30），使鸽的平均最小公斤致死量在25~34ml之间。 2.5 供试品溶液及稀释液 按洋地黄供试品的标示效价或估计效价配制溶液。 2.5.1 粉末 按标准品溶液及稀释液配制方法操作。 2.5.2 片剂 2.5.2.1 取洋地黄片20片以上，精密称量。计算平均片重，迅速研磨成细粉。 2.5.2.2 精密称取不少于20片的粉末，根据片重及标示效价折算估计单位，按标准品溶液及稀释液的配制方法操作。 2.5.3 酊剂 按标准品稀释液的配制方法操作。 供试品稀释液和标准品稀释液的鸽平均最小公斤致死量（ml）应相近。 3 试验动物 3.1 健康无伤的鸽，雌雄均可，体重在250~400g，但每次实验中所用鸽体重相差不得超过100g。 3.2 实验前16~24h移去饲料，但仍给予饮水。 3.3 实验当日，按体重均匀分成两组，每组至少6只，一组为标准品组，一组为供试品组，两组间鸽的情况应尽可能相近。 4 检定法 4.1 将标准品或供试品稀释液给鸽静脉灌注，测定每只动物的致死量。 4.1.1 鸽称量后使仰卧于鸽固定板上，固定两翅及两脚，卡住颈部使鸽不能挣扎。 4.1.2 灌注装置中充满供试溶液，排尽气泡。 4.1.3 滴定管灌注溶液调至零点。 4.1.4 手术 在一侧翼静脉处拔除羽毛少许，使翼静脉清晰可见，将连接灌注装置的注射针头向心端插入翼静脉。 4.1.5 打开滴定管活塞。灌注溶液开始时一次快速注入0.5ml，然后以0.2ml/min的等速连续注入，灌注开始记录时间。整个过程按附表随时核对时间与进入药液速度，相差不得超过0.4ml。 开始插入弯针头时，如发现不通畅或打开滴定管活塞时出现进针处有肿胀，说明针头未插入静脉，应关闭活塞，可另换一侧翼静脉重插，如灌注中途出现肿胀，结果应废弃。 4.1.6 终点观察 鸽中毒死亡，立即停止注入稀释液，一般鸽死亡前有强烈颤抖、恶心呕吐、排便等现象，至瞳孔迅速放大、呼吸停止为终点，记录注入稀释液的总量（ml）。 5 实验结果计算 5.1 将每只鸽注入稀释液的总量（ml）换算成每公斤体重致死量（ml）中所含单位数（U/kg），取其10倍量的对数值作为反应值。（计算最小致死量的对数时，为避免负对数值的麻烦，将各反应值均乘以10，这样不影响曲线的形态及误差的估计）。 5.2 将反应值按《中国药典》附录生物检定统计法列表的格式整理。 5.3 按直接测定法公式处理结果，计算M、R、PT、Sm、FL、FL%。 以上计算也可编制程序，用计算机计算。 6 结果判定 6.1 实验误差(FL%)的判断 按药典规定，FL%超过者，可做以下处理： 6.1.1 检查动物来源、实验操作等是否符合本实验的要求。 6.1.2 重复实验。 6.1.3 增加每组试验动物以减少误差。 7 计算举例 洋地黄效价测定---鸽法 标准品溶液 1.0U/ml 稀释1→30 供试品 叶粉 估计效价 10U/g 供试品溶液 0.1g/ml 稀释1→30 结果见表1，2。 效价（PT）的计算 M=-=1.0132-0.9923=0.0209 R=antilogM=