植物MS组培实验(use).docVIP

实验流程 （1）实验总流程： MS母液培养基的配置→胡萝卜愈伤组织诱导培养培养基的配制→胡萝卜愈伤组织诱导→胡萝卜愈伤组织的继代培养→观察记录 （2）无菌操作流程： 实验员消毒→实验室、无菌台灭菌→实验器材的灭菌→无菌接种→消毒→实验台卫生 （3）胡萝卜愈伤组织诱导培养流程： 胡萝卜愈伤组织诱导培养基的配置→胡萝卜愈伤组织诱导培养培养基的分装→胡萝卜愈伤组织诱导培养培养基灭菌→取材及材料的消毒灭菌→接种与培养 （4）胡萝卜愈伤组织的继代培养流程： 器械及实验者的消毒灭菌→剥离愈伤组织诱导培养所得的愈伤组织→胡萝卜愈伤组织接 MS液体成份的配制 MS培养基是Murashige和Skoog于1962年为烟草细胞培养设计的，其特点是无机盐和离子浓度较高，其养分的数量和比例合适，是较稳定的离子平衡溶液，能满足植物细胞的营养和生理需要，适用范围比较广，多数植物组织培养快速繁殖用它作为培养基的基本培养基。 μL、100μL）、药勺。 2、实验试剂： 见下述实验方案中所列。 四、实验方案与操作 1、大量元素配制（贮备液I） KNO3 1900 mg/L（1.9g/L） NH4NO3 1650 mg/L（1.65g/L） KH2PO4 170 mg/L（0.17g/L） MgSO4. 7H2O 370 mg/L（0.37g/L） CaCl2. 2H2O 440 mg/L（0.44g/L）（可单独瓶配制存放） 2、微量元素100X母液（贮备液II）配制： 配制100X（倍）浓度大量元素母液1000mL，按顺序充分溶解后再加后一个试剂。 KI 0.83 mg/L（先配母液：0.83 g KI溶于8 mL水） H3BO3 6.2 mg/L（先配母液：0.62 g溶于8 mL水） MnSO4 .4H2O 22.3 mg/L（先配母液：0.22 g溶于8 mL水） ZnSO4 .7H2O 8.6 mg/L（先配母液：0.86 g溶于8 mL水） Na2MoO4 .2H2O 0.25 mg/L（先配母液：0.25 g溶于8 mL水） CuSO4 .5H2O 0.025 mg/L（先配母液：0.25 g溶于8 mL水） CoCl2 .6H2O 0.025 mg/L（先配母液：0.25 g溶于8 mL水） 3、铁盐100X母液（贮备液III） 配制100X（倍）浓度大量元素母液1000mL，按顺序充分溶解后再加后一个试剂。 Na2 EDTA .2H2O 37.3 mg/L FeSO4 .7H2O 27.8 mg/L 4、有机成分100X母液（贮备液IV） 配制100X（倍）浓度大量元素母液1000mL，按顺序充分溶解后再加后一个试剂。 肌醇 100 mg/L 甘氨酸 2 mg/L （先配母液：0.2 g溶于8 mL水） 盐酸硫胺素(VB1) 0.1 mg/L（先配母液：0.02 g溶于8 mL水） 盐酸吡哆醇(VB6) 0.5 mg/L（先配母液：0.05 g溶于8 mL水） 烟酸(VB5) 0.5 mg/L（先配母液：0.02 g溶于8 mL水） 5、植物生长调节剂的配制： 6-BA(1mg/mL）：称10mg 6-BA先溶于1mL 1M盐酸充分溶解，再加9mL以蒸馏水，混匀。 NAA(1mg/mL）：称10mg NAA先溶于1mL 95%乙醇充分溶解，再加9mL以蒸馏水，混匀。 五、实验注意事项 1、配制贮存母液时，要算好各种成分逐次加入，等第一种成分完全溶解后再加入第二种成分，切忌“一锅煮”。有机物质配好以后要装入棕色瓶放入电冰箱内保存，其它三种母液可在常温下保存但最多不能超过一个月； 2、pH值对培养基的硬度有影响，pH过高培养基变硬，pH过低培养基不能凝固，所以要调整好培养基的pH值 MS固体培养基配制μL、100μL）、称量纸、卷纸、电子天平、药勺 2、实验试剂：10％NaOH、1M HCl、蔗糖，琼脂 三、实验操作步骤 1、在1000mL塑料量杯中，先加入800mL双蒸水，再按比例依次加入下列MS成份： 大量元素20X母液：微量元素100X母液、铁盐100X母液、有机成份100X母液 50mL 10mL 10mL