淺谈PCR仪温度校准的必要性及方法.docVIP

PAGE \* MERGEFORMAT 5 浅谈PCR仪温度校准的必要性及方法 朱晨彬 ，朱毅晨，姚丽芳，张丽萍，陈宇，朱学平 （上海市计量测试技术研究院） 摘要：本文分析了PCR仪使用的现状及其进行温度校准的必要性。提出了PCR仪温度校准的方法和校准项目（温度准确性，温场均匀性，升降温速率，最大超调温度）以及数据处理方法，并分析了每一校准项目的重要性。 关键词：PCR仪，温度校准，温度准确性，温场均匀性，升降温速率，最大超调温度 引言 PCR是聚合酶链反应(polymerase chain reaction)的简称，是在短时间内体外大量扩增特定的DNA片段的分子生物学技术。自动完成聚合酶链反应，提供DNA 扩增的温度条件而设计的仪器称为PCR仪。 PCR仪主要用于DNA片段的放大，可将DNA分子或某一DNA片段于数小时内扩增至十万乃至百万倍，在这过程中主要是3个特征温度循环： 高温变性：把样品加热至90～95℃让DNA模板变性变成单链。 低温退火：让样品的温度迅速下降至50～65℃,引物就可以结合到模板上去。 适温延伸：让样品的温度上升至70～75℃,DNA聚合酶就可以从引物开始用底物复制出新链。 因此，在PCR反应过程中对温度控制的要求很高，良好的温度控制是PCR仪质量好坏的关键。 二、PCR基因扩增仪校准的现状 PCR仪的控温精度、升降温速率以及温场的均