第11章體外试验与新生物技术在毒理学中的应用.docVIP

第八章 毒理学评价的分子生物学方法 分子毒理学固然应主要着眼于生物大分子，但也应当看到这些大分子是存在于细胞膜上、细胞器内，乃至细胞间隙液中的。它们与细胞是不可分离的。因此，对亚细胞组分的研究也是毒理学分子生物学评价的重要组成部分。 第一节 亚细胞组分的制备 现代毒理学中使用最多的亚细胞组分是细胞膜、微粒体及线粒体。现就细胞膜、微粒体及线粒体的制备方法加以介绍。 一、细胞膜的制备 细胞膜指细胞外层质膜，厚度约6～10nm。它将细胞与外环境分隔，且参与细胞的生命活动，细胞内各种细胞器也是由质膜分隔，称为细胞器膜，两者统称为生物膜。它是常用的研究模型，用以从细胞和亚细胞水平研究外源化合物的中毒机制。 1．肝细胞膜的制备 其基本原理是：首先，将肝组织在含有钙离子的低渗碳酸氢钠缓冲液中温和匀浆，使细胞膜保持较大的膜片；其次，应用低速离心使细胞膜片与细胞核一起从匀浆中分离，再利用细胞膜与细胞核之间的密度差异，用密度梯度离心将细胞膜从低速离心获得的粗核部分中分离出来。 2．红细胞膜的制备 哺乳动物红细胞不含任何细胞器，故其红细胞膜是较纯净的细胞膜。 (1)红细胞血影膜 常用的制备方法是在低渗条件下，红细胞膨胀，由双面盘状变成近乎球形，随后细胞内容物因胞膜破裂而释放，20 000g离心。洗涤去除血红蛋白，即获红细胞膜。此种膜最接近整体系统，仍保