綜合试验土壤中微生物主要类群的分离1.docVIP

（请注意最后页上的注意事项） 土壤微生物主要类群的分离、记数及形态特征比较 生 命 科 学 与 技 术 学 院 姓 名 指 导 教 师 徐 军 韩 炎 摘要：主要内容：本实验是微生物学综合性实验项目，包含了微生物学实验中的微生物的分离和纯化、微生物的选择性培养、平板菌落计数（即活菌计数）、培养基的制备、高压蒸汽灭菌、微生物主要类群的培养特征和形态特征、制片染色技术等。 [1] 本文记录了对采自校园附近农田的土样中微生物主要类群的分离和纯化等试验操作方法和结果。所采每克土样中几种不同类群微生物的含量分别为：细菌 个、放线菌 个、霉菌 个、自生固氮菌 个，说明土壤中微生物种类的繁多和数量的庞大。培养基的种类和组分的不同可用于分离或富集不同的微生物。 关键词：分离 纯化 平板菌落计数 微生物的形态 1.前言：主要内容 （1）、微生物在自然界及其在土壤中的分布简况；（2）、土壤中各种类群的微生物的含量的大致情况；（3）、土壤中的微生物的作用；（4）、本实验的主要过程和实验结果，对实验结果的简单说明和分析，通过实验得到的结论等。第（1）～（3）项，请参阅或引用教材第八章-微生物的生态及其他参考文献的相关内容。[所引用的内容请用带数字的中括号标于引用内容最后面的右上角，如下面的2.1.2.1营养琼脂（牛肉膏蛋白胨固体培养基）[1]。] 2.材料与方法 2.1材料 2.1.1土样：以无菌方式采于学校附近农田，置于无菌容器中，待检 2.1.2培养基 2.1.2.1营养琼脂（牛肉膏蛋白胨固体培养基）[1]：写出培养基配方及灭菌条件 2.1.2.2高氏一号固体培养基1[1]：（写出培养基配方及灭菌条件）灭菌后，在100ml培养基中加入10%酚溶液5滴（作为抑制剂，以抑制细菌的生长），制备平板备用。 2.1.2.3查氏固体培养基[1]：写出培养基配方及灭菌条件 2.1.2.4马丁氏培养基：[1]：写出培养基配方及灭菌条件 2.1.2.5无菌水：装有90ml蒸馏水和数拾粒玻璃珠的250ml锥形瓶一只，装有9ml蒸馏水的18×180mm试管数支；121.3℃， 20分钟灭菌，备用 2.1.3染色液 2.1.3.1革兰氏染色液[1] 写出用于革兰氏染色的四种溶液 2.1.3.2 0.1%美蓝[1] 用于放线菌菌丝形态观察 2.1.3.3乳酸石炭酸棉蓝液[1] 写出配方，用于霉菌形态观察 2.2方法 2.2.1制备土壤稀释液 写（或画）出制备稀释液的方法 2.2.2制备及涂布平板 各种培养基平板的数量、用于分离微生物的类群；平板中加入土壤稀释液的浓度和加入的量等，培养基名称可用符号代表，如：高氏一号固体培养基平板可表述为培养基2.1.2.2平板。具体操作方法可参考实验教材或实验记录。 2.2.3培养 不同类群的微生物培养的温度和时间，如：培养基2.1.2.1平板倒置于37℃培养箱，2～3天；培养基2.1.2.2平板倒置于28℃培养箱5～7天；培养基2.1.2.3和培养基2.1.2.4平板倒置于28℃培养箱3～5天； 2.2.4菌落计数 培养结束后，根据不同类群的微生物的菌落特征，分别在不同的培养基平板上统计相关类群的微生物菌落，即培养基2.1.2.1统计细菌的菌落；培养基2.1.2.2统计放线菌的菌落；培养基2.1.2.3和培养基2.1.2.4统计霉菌的菌落。 由下式计算每克土壤中相关微生物的菌落形成单位（cfu）： 个/克=同一稀释度三次重复的平均菌落数×稀释倍数×5 2.2.5挑单菌落 从不同的培养基平板上，选取细菌、放线菌和霉菌各三个菌落（先记录菌落特征）分别转接到营养琼脂、高氏一号、查氏培养基斜面中，每个菌落接两支斜面试管，编号标记（以各小组的编号作为菌株编号的前两位。细菌、放线菌、霉菌分别用x、f、m表示。如：A1x-01为A组第一小组分离的第一号细菌），分别置培养箱培养，备用 2.2.6细菌的革兰氏染色和形态观察 对从2.2.5中选出的细菌分别做革兰氏染色，观察记录三株细菌的革兰氏染色结果和个体形态 2.2.7放线菌的插片培养和形态观察 对从2.2.5中选出的放线菌分别做平板划线、插片培养，培养后观察记录三种放线菌的菌丝形态。每个平板中，以约45°角将1-2片无菌盖玻片斜插入平板上第一次划线的部位。（每人做一套） 2.2.8霉菌的点植培养和形态观察 对从2.2.5中选出的霉菌分别做点植培养，每个平板上点植接种三个点，培养后制片，观察、记录三种霉菌的菌丝和产无性孢子的子实体的形态（由分离霉菌的小组完成，两套/株霉菌） 3.结果 3.1土壤样品中细菌、放线菌、霉菌的菌落形成单位（cfu）见表1、表2、表3： 表1 细菌 稀释度 10-5 10-6 10-7